铜绿假单胞杆菌在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130摄氏度以下的低温中能减少冰晶的形成。细胞复苏时速度要快,使之迅速通过细胞较容易受损的-5~0摄氏度,细胞仍能生长,活力受损不大目前常用的保护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。合适的铜绿假单胞杆菌温度通常在45~68摄氏度之间(预备实验可2摄氏度间隔进行)。另外,由于在60~68摄氏度间,也有很高的活性,因此可在此温度范围内设定铜绿假单胞杆菌温度,进行2StepPCR。铜绿假单胞杆菌温度为68摄氏度时,每kbp大体可设定30秒~1分钟;当温度设定在68摄氏度以下时,时间设定可稍长一些。金黄色葡萄球主要是用于口罩阻菌性能验证及其他相关检测。黄色腾格里线菌
金黄色葡萄球菌对宿主的传染分为粘附、侵入两个阶段。金黄色葡萄球菌侵染宿主的不同阶段,需要不同的致病因子发挥作用。在传染的早期阶段,它主要通过纤维蛋白原,纤连蛋白和细胞角蛋白定植在机体的表皮内。在指数阶段的早期,它会产生细胞壁相关因子,使菌体积聚并形成生物膜,促进其对宿主细胞或组织粘附以及逃避宿主免疫系统的清理。一旦菌体达到指数期后期,它便开始下调细胞壁相关因子,使生物膜分散,同时分泌出一系列外蛋白,包括蛋白酶、溶血素、超抗原等,传染宿主细胞或组织。在侵染机体的整个过程中,金黄色葡萄球菌表面蛋白在生物膜形成、突破宿主防御系统、免疫逃避等方面发挥重要作用,这些表面蛋白是现阶段金黄色葡萄球菌疫苗研究目标之一。假单孢菌属菌株铜绿假单胞菌为土壤中存在的较常见的细菌之一。
铜绿假单胞菌生长对营养要求不高。对有正常菌群存在的临床标本或采自环境中的标本应接种选择性培养基如麦康凯琼脂培养基(MAC);对无正常菌群存在的临床标本如血液、脑脊液、穿刺液等可接种普通全营养型培养基(如TSA、PCA、营养琼脂}或血琼脂培养基、铜绿假单胞菌培养基。普通琼脂培养基上生长18~24h可以见到扁平、湿润的菌落,铜绿假单胞菌所产生的带荧光的水溶性青脓素与绿脓素相结合将使得培养基呈亮绿色;在血琼脂平板上生长时可以见到在菌落的周围有溶血环,菌落呈金属光泽;在铜绿假单胞菌培养基上呈蓝绿色或者红褐色菌落,365nm紫外灯下显荧光。如果是在液体培养基中则呈浑浊状生长,在液体表面形成菌落,而在培养基底部细菌的生长不良。
冻存铜绿假单胞杆菌时,要先消化细胞,将细胞悬液收集至离心管中。1000rpm离心10分钟,弃上清液。沉淀加含保护液的培养,计数,调整至5×106/毫升左右。将悬液分至冻存管中,每管1毫升。将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口,封口一定要严,否则复苏时易出现爆裂。贴上标签,写明细胞种类,冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。按顺序降温,室温→4摄氏度(20分钟〕→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-30摄氏度1小时)→气态氮(30分钟)→液氮。注意操作时应小心,以免液氮冻坏。液氮定期检查,随时补充,不能挥发干净,一般30立升的液氮能用1~1.5月。购买大肠杆菌时要根据自身需求去购买,而不是随便买。
金黄色葡萄球菌的检验方法操作步骤:血浆凝固酶试验:吸取1:4新鲜兔血浆0.5mL,放入小试管中,再加人培养24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤堵养物0.5mL,振荡摇匀,置36℃士1℃温箱或水浴内,每半小时观察一次,观察6h,如呈现凝固,即将试管倾斜或倒置时,呈现凝块者,被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。直接计数方法6.2.1吸取上述1:10混悬液,进行10倍递次稀释,根据样品污染情况,选择不同浓度的稀释液1mL,分别加人三块Baird一Parker平板,每个平板接种量分别为0.3mL、0.3mL、0.4mL,然后用灭菌L棒涂布整个平板。如水分多不易吸收,可将平板放在36℃士1℃lh,等水分蒸发后反转平皿置36℃士1℃培养。大肠杆菌是革兰阴性杆菌,周身鞭毛,能运动,无芽孢。伸长盐单胞菌菌种
处理用枯草芽孢杆菌处理过的土壤对土壤脲酶均表现出刺激效应。黄色腾格里线菌
金黄色葡萄球菌产生的耐热性肠有害元素简称SEs,是由血浆凝固酶或耐热核酸酶阳性的菌株所产生的一类结构相关、毒力相似、抗原性不同的胞外蛋白质。有A-E、G-V及X型(即SEA等),其中C型抗原又分为3个亚型(C1、C2、C3),SEG、SEI、SEK为新发现的肠有害元素。所有的有害元素都有以下共同特性:具有引起急性胃肠炎的能力(催吐性);刺激非特异性T细胞增殖的超抗原特性;对热和蛋白酶消化作用的抵抗能力(即肠有害元素对热和水解酶的变性都有很高的耐性);分子内都存在二硫键。黄色腾格里线菌
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