MBP免疫荧光染色

其他荧光物质：酶作用后产生荧光的物质某些化合物本身无荧光效应，一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮，后者可发出荧光，激发光波长为360nm，发射光波长为450nm。其他如碱性酸酶的底物4-甲基伞酮磷酸盐和辣根过氧化物酶的底物对羟基乙酸等。镧系螯合物某些3价稀土镧系元素如铕（Eu3）、铽（Tb3）、铈（Ce3）等的螯合物经激发后也可发射特征性的荧光，其中以Eu3应用较广。Eu3螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，较适合用于分辨荧光免疫测定。免疫荧光技术可以用于研究细胞凋亡和细胞存活。MBP免疫荧光染色

荧光素标记抗体的方法：方法及步骤：①抗体的准备：取适量已知球蛋白浓度之溶液，置入三角烧瓶中，加入生理盐水及碳酸盐缓冲液，使然后蛋白浓度为20mg/ml，缓冲液容量为总量的1/10，混匀，将三角烧瓶置冰槽中，电磁搅拌（速度适当以不起泡沫为宜）5～10min。②荧光素的准备：根据欲标记的蛋白质总量，按每毫克蛋白加0.01mg荧光素，用分析天平准确称所取所需的异硫氰酸荧光素粉末。③结合（或称标记）：边搅拌边将称取的荧光色素渐渐加入球蛋白溶液中，避免将荧光素粘于三角烧瓶壁或搅拌玻棒上（大约5～10min内加完），加毕后，继续搅拌12～18h。结合期间应保持蛋白溶液于4℃左右，故须及时添冰去水；亦可将结合装置安放在4℃冰箱或冰库中。FITC免疫抗体免疫荧光技术可以用于研究疾病的发生机制和医治效果评估。

在肝脏纤维化的研究中，多重免疫组化可用于标记肝星状细胞的标志物，如 α - 平滑肌肌动蛋白（α - SMA），细胞外基质成分，如胶原蛋白 I 和 III，以及与纤维化相关的生长因子，如转化生长因子 - β（TGF - β）。肝星状细胞在肝脏纤维化过程中活化并转化为肌成纤维细胞，大量合成细胞外基质。通过观察这些标志物的变化，可以了解肝星状细胞的活化程度、细胞外基质的沉积情况以及 TGF - β 在纤维化进程中的调控作用。例如，TGF - β 可以刺激肝星状细胞表达 α - SMA，促进胶原蛋白的合成，通过多重免疫组化的研究有助于找到抑制肝脏纤维化的关键靶点。

免疫荧光检测对比于酶检测存在着诸多明显的优势。其中就包括定量荧光信号的优异能力（这与采用基于酶的方法所进行的定性测定是截然相反的），其能够以极高的精度对荧光信号进行量化分析，这种能力使得我们可以更加深入、细致且准确地了解和把握相关信息。还有复用能力，也就是说能够将具有各异发射光谱的荧光染料巧妙地结合起来，以此来实现对多种不同蛋白质的同步检测，这极大地拓展了检测的广度和深度，提升了检测的效率和全面性。此外，荧光染料还具备极其出色的光稳定性，这为检测过程的顺利进行以及结果的可靠性提供了有力的保障。免疫荧光技术在免疫学研究中发挥重要作用，帮助揭示细胞和分子的功能和相互关系。

免疫荧光-实验步骤：细胞爬片免疫荧光：在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次5min;（圆盖片：13mm24孔；18mm12孔；20mm6孔）用4%的多聚甲醛固定爬片15min,PBS浸洗玻片3次,每次5min0.5%TritonX-100(PBS配制)室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤);PBS浸洗玻片3次,每次3min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加3%的BSA（PBS配置）,室温封闭30min5,吸水纸吸掉封闭液,不洗,每张玻片滴加足够量用PBS稀释好的一抗并放入湿盒,4℃孵育过夜。加荧光二抗:PBS浸洗爬片3次,每次5min,吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中室温孵育50min。荧光抗体技术具有高灵敏度和高特异性，可以实现精确的免疫检测。C-Caspas3免疫荧光

免疫荧光技术可以用于研究免疫系统的功能和异常。MBP免疫荧光染色

免疫荧光间接法：如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗体—抗原—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为一抗体，其它步骤的抗原检查相同。标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性，如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应，因此，制备标记抗体适用于任何抗原的诊断。MBP免疫荧光染色