荧光抗体技术:抗原抗体反应后,利用荧光显微镜判定结果的检测方法。免疫荧光测定:抗原抗体反应后,利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法。免疫荧光实验步骤:直接法测抗原:基本原理:将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。荧光抗体技术可用于检测和定位各种抗原,也可以用于检测和定位抗体。MCP1免疫抗体
在病毒性肝炎的研究中,肝脏组织中的免疫反应对于疾病的发展和转归至关重要。利用多重免疫荧光,我们可以用不同颜色标记肝细胞中的肝炎病毒抗原、免疫细胞(如T淋巴细胞、巨噬细胞)以及细胞因子。例如,用绿色荧光标记乙肝病毒表面抗原(HBsAg),红色荧光标记肝组织中的CD8+T细胞,蓝色荧光标记干扰素-γ(IFN-γ)。这样就能直观地看到乙肝病毒在肝细胞中的分布、免疫细胞对病毒感染细胞的攻击情况以及细胞因子在免疫应答中的作用。在肝脏纤维化的研究方面,多色免疫荧光可用于标记肝星状细胞、细胞外基质成分以及与纤维化相关的生长因子。比如,用绿色荧光标记肝星状细胞中的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),红色荧光标记胶原蛋白,蓝色荧光标记转化生长因子-β(TGF-β)。通过观察这些标记成分的分布和变化,可以深入研究肝脏纤维化的发生机制,包括肝星状细胞的活化、细胞外基质的沉积以及生长因子的调控作用。CK7免疫荧光染色免疫荧光技术可以用于研究免疫系统的功能和异常。
zo-1的免疫荧光,步骤如下:1.细胞在盖片上生长融合到95%-100%时,从孵箱中取出。2.用预温的1×PBS洗3次,每次10分钟。3.4%的甲醛室温固定20-30分钟。4.1×PBS洗3次,每次10分钟。5.0.2%TritonX-100透化2-5分钟。6.1×PBS洗3次,每次10分钟。7.5%BSA室温封闭30分钟。8.加一抗(用1%BSA稀释)放在湿盒里,4度过夜。9.1×PBS洗3次,每次10分钟。10.加二抗(用1%BSA稀释)30分钟,闭光。11.1×PBS洗3次,每次10分钟。12.95%甘油封片。注:4%甲醛,0.2%Triton,5%BSA均用1×PBS稀释。
其他荧光物质:1.酶作用后产生荧光的物质某些化合物本身无荧光效应,一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮,后者可发出荧光,激发光波长为360nm,发射光波长为450nm。其他如碱性酸酶的底物4-甲基伞酮磷酸盐和辣根过氧化物酶的底物对羟基乙酸等。2.镧系螯合物某些3价稀土镧系元素如铕(Eu3+)、铽(Tb3+)、铈(Ce3+)等的螯合物经激发后也可发射特征性的荧光,其中以Eu3+应用较广。Eu3+螯合物的激发光波长范围宽,发射光波长范围窄,荧光衰变时间长,较适合用于分辨荧光免疫测定。所需要的仪器:荧光显微镜、显微荧光分光光度计、流式细胞仪和时间分辨荧光计等仪器激光共聚焦显微镜。早期的免疫荧光技术是将抗体与示踪物质结合,用于定位组织或细胞内的抗原物质。
免疫荧光在神经退行性疾病研究中具有广泛的应用,为解开这些疾病的谜团提供了重要手段。在阿尔茨海默病的研究中,免疫荧光可用于标记β-淀粉样蛋白(Aβ)和tau蛋白。Aβ的沉积和tau蛋白的过度磷酸化是阿尔茨海默病的主要病理特征。通过免疫荧光,可以观察到Aβ斑块和tau蛋白缠结在大脑组织中的分布情况。这有助于研究人员深入了解阿尔茨海默病的发病机制,探索疾病的早期诊断方法,以及评估潜在***药物对这些病理特征的影响。在帕金森病的研究中,免疫荧光可以标记α-突触**白。α-突触**白的聚集形成路易小体是帕金森病的重要病理标志。通过免疫荧光观察α-突触**白在神经元中的聚集情况,能够研究帕金森病的神经元损伤机制,以及寻找可能的干预靶点。免疫荧光技术可以用于研究细胞迁移和细胞黏附。ERK免疫组化
免疫荧光技术具有高灵敏度和高特异性,可以检测非常低浓度的目标分子。MCP1免疫抗体
免疫荧光的原理:免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。直接法:将标记的特异性荧光抗体,直接加在抗原标本上,经一定的温度和时间的染色,用水洗去未参加反应的多余荧光抗体,室温下干燥后封片、镜检。MCP1免疫抗体
在肺*的研究中,多重免疫组化是肺*精细诊断和***的重要依据。可以标记肺*细胞的标志物,如细胞角蛋白 7(CK7)、甲状腺转录因子 - 1(TTF - 1),同时标记**微环境中的免疫细胞标志物,如程序性死亡受体 - 1(PD - 1)及其配体(PD - L1),以及血管内皮生长因子(VEGF)。CK7 和 TTF - 1 有助于区分肺*的类型,如腺*和鳞*。PD - 1/PD - L1 的表达与肺*的免疫逃逸机制有关,VEGF 则与**血管生成相关。通过观察这些标志物在肺*组织中的分布和相互关系,可以为肺*的精细分型、免疫***和靶向***提供重要信息。免疫荧光技术可以用于研究疾病的发生机制...