CD8免疫抗体

免疫荧光通透（目的是使抗体进入胞内），0.5%TritonX-100(一种去垢剂，用PBS配制)室温通透20min（针对胞内抗原，若是细胞膜上表达的抗原则省略该步骤）；除了TritonX-100，也可作为通透剂，并且固定后的样品不需要通透。封闭（减少一抗和二抗与非特异位点进行结合），通透后用PBS浸洗玻片3次，每次3min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加山羊血清，室温封闭30min。常用的封闭液包括：与二抗同一来源的血清、BSA或者是羊血清。从封闭开始所有的步骤，一定要注意样品的保湿，避免样品的干燥，否则极易产生较高的背景。醛类固定的样品，在用一抗孵育前用含0.3M甘氨酸的封闭液进行封闭。免疫荧光技术可以用于研究细胞凋亡和细胞存活。CD8免疫抗体

荧光素标记抗体的方法：方法及步骤：①抗体的准备：取适量已知球蛋白浓度之溶液，置入三角烧瓶中，加入生理盐水及碳酸盐缓冲液，使然后蛋白浓度为20mg/ml，缓冲液容量为总量的1/10，混匀，将三角烧瓶置冰槽中，电磁搅拌（速度适当以不起泡沫为宜）5～10min。②荧光素的准备：根据欲标记的蛋白质总量，按每毫克蛋白加0.01mg荧光素，用分析天平准确称所取所需的异硫氰酸荧光素粉末。③结合（或称标记）：边搅拌边将称取的荧光色素渐渐加入球蛋白溶液中，避免将荧光素粘于三角烧瓶壁或搅拌玻棒上（大约5～10min内加完），加毕后，继续搅拌12～18h。结合期间应保持蛋白溶液于4℃左右，故须及时添冰去水；亦可将结合装置安放在4℃冰箱或冰库中。MYeloperoxidase免疫荧光分析免疫荧光技术利用荧光染料标记的抗体与目标分子结合，从而实现可视化检测。

细胞免疫荧光主要用于蛋白定位研究和细胞内信号转导，细胞免疫荧光技术是利用免疫技术和荧光标记技术相结合，原理就是利用抗原-抗体反应之后，采用荧光标记，标记完成后，显微镜下观察细胞内某种抗原成分的多少，从而做出一个定位研究，也可以为细胞内信号传导提供一个明确的指导，细胞免疫荧光具有敏感性强、特异性高、速度快的特点，是目前比较常用的组织学技术，也是比较精确的。免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合来显示目的蛋白，主要包括蛋白和一抗结合，其次是带有荧光基团的二抗识别并结合一抗，荧光显微镜下即可观察到荧光。

细胞免疫荧光步骤是什么呢？步骤：1. 细胞一定要贴在玻片上（较好可以放入24孔板），为后面照像打基础。细胞密度适中，大约60-75%满片即可，否则容易脱片。2. 取出细胞后用4%多聚甲醛固定15分钟，现用现配。（以下各步骤切毋使玻片干燥）3. PBS冲洗；4. 0.1%Triton作用20分钟；5. PBS冲洗；6. 10%正常血清封闭10分钟；7. 加入一抗，4度孵育过夜（找个小瓶盖将小玻片支起来，抗体就不容易溢出），还要记住“砸片”，就是抗体从较高处落到片子上，以分布均匀。抗体稀释度1：60，较常用！8. PBS冲洗4次，各5分钟；9加入荧光二抗，室温30分钟。抗体稀释度1：400，较常用！10. 90%甘油封片。也很关键阿，多封几次才有体会。12. 避光保存，或到显微镜下观察。免疫荧光细胞化学技术用于显示和检查细胞或组织内的抗原或半抗原物质。

免疫荧光实验步骤：1.样本准备：细胞或薄组织。对单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片，PBS洗两次；对悬浮生长细胞，取对数生长细胞，用PBS离心洗涤（1000rpm,5min）2次，用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂片。2.固定：取适当的固定剂固定样本。一般用4%PFA固定4℃过夜。固定完毕后的样本可置于含叠氮纳的PBS中4℃保存3个月。3.洗涤：PBS洗涤5min*3次。4.打孔：选择合适的通透剂处理样本，目的是使抗体更容易进入细胞与抗原结合。免疫荧光技术中，以荧光物质标记抗体来定位抗原物质的方法被称为荧光抗体技术。MYeloperoxidase免疫荧光分析

免疫荧光技术可以用于研究植物病理学和农业生产。CD8免疫抗体

免疫荧光间接法：如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗体—抗原—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为一抗体，其它步骤的抗原检查相同。标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性，如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应，因此，制备标记抗体适用于任何抗原的诊断。CD8免疫抗体