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胶原蛋白分离提纯实验方案：提取鼠尾胶原蛋白的实验步骤： 1、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液对初步处理的鼠尾腱进行 酶解， 持续一段时间待混合物变成无色、 透明、 粘稠液体后即可在 4℃， 5000g 的离心力下离心 20min， 收集上清即为粗制鼠尾胶原蛋白原液。 2、将一定浓度的氯化钠溶液加入其中，持续搅拌直至白色絮状沉淀 从溶液中析出，继续加入氯化铵直至沉淀不在析出为止，4℃，5000g 的离心力下离心 20min 后获得白色沉淀。 沉淀物加入一定浓度的醋酸 溶液中溶解。 3、将溶解后的鼠尾胶原蛋白溶液继续反复进行盐析处理，重复步骤 2 的过程 2~4 次。 _x000c_鼠尾胶原蛋白经 SDS- PAGE 蛋白质电泳。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录。南昌正规鼠尾胶原厂家现货

生物医用鼠尾胶原蛋白的提取方法，采用酸法与酶法相结合的工艺，保持恒低温无菌的环境，利用同样浓度的盐溶液进行两次盐析与离心，简化了提纯步骤。所用酸为低浓度酸溶液，并采用柠檬酸替代醋酸进行提纯。从提取原料到样品生成过程中，进行多次真空冷冻干燥，并经进一步处理获得含水率在3％以下的胶原蛋白微粉；较后由灭菌、无菌包装，成品胶原蛋白粉末的纯度在98％以上。本发明获得的胶原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了产率和生物相容性，降低了成本，适用于生物医用材料，所得到的胶原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋结构。武汉正规鼠尾胶原服务电话自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞，细胞角蛋白18表达阳性。

鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项：将培养器皿在室温(25 度左右)下 放置 20 分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是 10PBS， 使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。 B．含细胞的三维胶原的制备（以配制 200ul鼠尾胶原蛋白(5mg/ml)加到（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH 加到胶原溶液中，会由于 NaOH 不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即 混匀。再加入 23ul 10PBS 10培养液，混匀(混匀后pH 左右，如果 PBS 或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用 pH 试纸测试)。加入 760ul 的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放 20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。 注意事项 型在室温下pH 中性时可迅速成胶，在操作过程中要 尽量保持低温。鼠尾肌腱胶原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根据Birkedal-Hansen方法，经过醋酸（HAc）抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备所得。

鼠尾胶原，是一种天然培养基，它具有促进体外培养细胞(特别是上皮细胞)贴壁的作用，同时也是一种天然的黏附剂，当我们需要在培养瓶或培养皿内放置小玻片，制备细胞爬片时，可在瓶底涂一层胶原，再放上小玻片，自然干燥后小玻片就固定于培养瓶之中。有点学术了，听不懂···贴壁，有什么意义？分散的单一细胞培养能够比较理想地反映细胞的具体生物特性。选择合适的培养基，可以解决培养中细胞脱落和细胞重聚的现象。鼠尾胶原，是一种细胞支持物，它是细胞外基质的主要成份，可直接或间接参与细胞的附着。鼠尾I型胶原蛋白系采用方法在无菌下制备，纯度达到95%以上，可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于细胞培养皿的包被，特别适合普通细胞培养器皿不易贴壁细胞的培养；也可用于制备三维胶原凝胶，使细胞在模拟的三维环境中生长。制备鼠尾胶原：重复步骤2、3，直至尾腱量够用。

胶原蛋白的提取方法：酶法提取：酶法提取是利用蛋白酶使胶原溶解，水解条件温和，反应速率快，提取的胶原蛋白仍有完整的三股螺旋结构，蛋白纯度高，理化性质稳定，且无环境污染。酶法提取常用的蛋白酶有：胃蛋白酶、胰蛋白酶或者复合酶。工艺可选择一步法，即利用酶液直接提取；二步法，即先用酸或者碱进行初步提取，然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO预处理革屑，然后用碱性蛋白酶提取胶原的水解产物。Cabeza L.F.T等[7]先用胃蛋白酶，再用碱性蛋白酶提取了2种不同的胶原水解产物。赵苍碧等[2]采用胃蛋白酶和无花果蛋白酶消化法从牛腱中提取胶原蛋白，探讨了酶和酶的加入量对提取结果的影响，给出了酶对胶原提取较佳工艺配比，酶与牛腱的质量比为0.1时效果较佳，而使用无花果蛋白酶时，0.01的配比较佳。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。成都正规鼠尾胶原供应商

胶原的立体结构与一般的球状蛋白质完全不同。南昌正规鼠尾胶原厂家现货

胶原蛋白的提取方法：1.碱法提取：碱法提取胶原蛋白常用的处理剂为石灰、氢氧化钠、碳酸钠等。如Holzer等[5]采用1 %～1.5 %石灰水浸泡的方法提取胶原蛋白。由于它容易造成肽键水解，因此得到的水解产物分子量比较低。所以，若想保留胶原的三股螺旋结构，此法不可取。2.盐法提取：盐法提取胶原蛋白所用的中性盐有盐酸-三羟甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化钠、柠檬酸盐等。在中性条件下，当盐的浓度达到一定量时，胶原溶解。并且可采用不同浓度的氯化钠对提取的胶原蛋白进行盐析处理，可以沉淀出不同类型的胶原蛋白。南昌正规鼠尾胶原厂家现货