鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明:含细胞的三维胶原的制备(以配制1毫升,1mg/ml三维胶为例):准备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中。将200ul鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23ul 10×PBS或10×培养液,混匀(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。厦门唐山鼠尾胶原
一种基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料及其制备方法:胶原蛋白是脊椎动物和无脊椎动物支持结构的主要组成。在人的身体中这是皮肤、筋、软骨、骨骼及结缔组织的较主要的蛋白质。胶原蛋白占人体蛋白质总量的三分之一, 不论来源于哪一种动物或哪一种组织的胶原都有许多共同特性。氨基酸组成中约有三分之一为甘氨酸,有脯氨酸和羟脯氨酸。根据其遗传分子结构遗传基因的差别,胶原蛋白分为20 几个亚型。但较为常见的为Ι、Π、ΙΙΙ型胶原蛋白,即间质胶原蛋白。其中I型较为丰富且品质优良。I型胶原蛋白分布非常普遍,是主纤维束的主要成分,给结缔组织以强度;是较丰富的胶原蛋白类型,尤其是在皮肤真皮、骨、筋和腱中。开封鼠尾胶原销售厂家氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。
要准备的器具:组织剪2把,有齿镊1把,无齿镊1把,200 ml烧杯1个,培养皿1个,带盖广口瓶1个,离心管、小瓶数个,滴管若干。以上物品须经严格高压消毒灭菌。需配制的液体0.1%醋酸溶液。经44.48N10 min高压蒸汽灭菌(或是过滤除菌)后备用。此外还有用消毒双蒸水配制75%酒精溶液。取大鼠尾巴,洗净,置75%酒精浸泡消毒后,手持尾巴,用止血钳夹住尾巴较高,折断尾骨后拉出尾腱,将尾腱剪碎后置消毒的三角烧瓶中,称尾腱的重量,按每克尾腱50ml 的比例加入0.1%醋酸溶液,摇晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置48 小时,离心。吸取其上清,分装至小瓶,4℃保存。上述制备过程均在无菌条件下完成。
鼠尾胶原蛋白I型,用那一种胶原酶可以溶解:1.将胶原加入到0.1M 的醋酸中,制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。2.建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。3.稀释一定数量的胶原溶液。4.按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。5.从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。如果胶原溶液不是无菌的,这时候可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。 在接种细胞前用无菌的水漂洗。制备鼠尾胶原:摇晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期。
胶原蛋白分离提纯实验方案:提取鼠尾胶原蛋白的实验步骤: 1、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液对初步处理的鼠尾腱进行 酶解, 持续一段时间待混合物变成无色、 透明、 粘稠液体后即可在 4℃, 5000g 的离心力下离心 20min, 收集上清即为粗制鼠尾胶原蛋白原液。 2、将一定浓度的氯化钠溶液加入其中,持续搅拌直至白色絮状沉淀 从溶液中析出,继续加入氯化铵直至沉淀不在析出为止,4℃,5000g 的离心力下离心 20min 后获得白色沉淀。 沉淀物加入一定浓度的醋酸 溶液中溶解。 3、将溶解后的鼠尾胶原蛋白溶液继续反复进行盐析处理,重复步骤 2 的过程 2~4 次。 _x000c_鼠尾胶原蛋白经 SDS- PAGE 蛋白质电泳。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。它是研究成纤维细胞与细胞外基质之间以及细胞之间相互作用的良好模型。昆明正规鼠尾胶原厂家供应
鼠尾胶原是一种天然培养基,它具有促进体外培养细胞(特别是上皮细胞)贴壁的作用。厦门唐山鼠尾胶原
如何补充胶原蛋白我们都知道胶原蛋白本身是大分子,不能被我们的肠胃直接吸收,而是会被分解转化为氨基酸,相当于吃进去了普通的蛋白质。只有具备生物活性的小分子胶原蛋白,才能直接渗进小肠黏膜细胞,补充到全身肌肤中。所以,想要吃进去的胶原蛋白能够有美肤**的效果,首先要挑对胶原蛋白。1、口服含胶原蛋白的食物骨肉汤、口服胶原蛋白补品等都属于胶原蛋白食物。但由于会被人的消化系统过滤掉很大一部分,且真正能到达肌肤并起到作用的量非常有限2.直接皮下注射主要用于填充深的皱纹,皮肤损伤造成的缺损(如青春痘疤)和修补脸形的缺陷等。其效果立竿见影,但注射到皮肤内的胶原蛋白会被人体逐渐吸收,因此其功效只能维持半年至一年,而且少数人群可能会出现过敏、传染等副作用。厦门唐山鼠尾胶原
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胶原蛋白的提取方法:酶法提取:酶法提取是利用蛋白酶使胶原溶解,水解条件温和,反应速率快,提取的胶原蛋白仍有完整的三股螺旋结构,蛋白纯度高,理化性质稳定,且无环境污染。酶法提取常用的蛋白酶有:胃蛋白酶、胰蛋白酶或者复合酶。工艺可选择一步法,即利用酶液直接提取;二步法,即先用酸或者碱进行初步提取,然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO预处理革屑,然后用碱性蛋白酶提取胶原的水解产物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶,再用碱性蛋白酶提取了2种不同的胶原水解产物。赵苍碧等[2]采用胃蛋白酶和无花果蛋白酶消化法从牛腱中提取胶原蛋白,探讨了酶和酶的加入量对提取结果的影响,给出了酶对胶原...