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细胞转染，你至少要掌握以下几点：胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越普遍。可分为瞬时转染，稳定转染等。瞬时转染是指外源 DNA/RNA 不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其他调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒 DNA 转染效率较高，在转染后 24-72 h 内分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。稳定转染是指外源 DNA 既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体存在。尽管线性 DNA 比超螺旋 DNA 转入量低但整合率高。外源 DNA 整合到染色体中概率很小，通常需要一些选择性标记反复筛选得到稳定转染的同源细胞系。转染试剂的准备①将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。贵阳正规细胞高效转染试剂平均价格

细胞转染，你至少要掌握以下几点：主要有下面几种方法：：化学法：磷酸钙法、DEAE-右旋糖苷法、阳离子脂质体法；物理法：电穿孔法、显微注射法、颗粒传递法；细菌介导法：逆转录细菌、腺细菌A. 阳离子脂质体法：带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。特点：简单通用，适用性广，转染效率高，重复性好，但转染时需除血清，转染效率随细胞类型变化大。由于脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会远大于悬浮细胞，所以贴壁比悬浮转染效率要高。悬浮细胞建议使用电穿孔法。B. 电穿孔法：利用高压电脉冲对细胞膜的干扰，使其形成利于核酸进入的微孔。贵阳正规细胞高效转染试剂厂家直销蛋白表达和培养基的选择哺乳动物细胞系合成可溶的。

细胞转染为什么不能加血清：传统的转染试剂一般会增加细胞的通透性，这样会把血清中的成分带入细胞，造成细胞毒性。阳离子脂质体，转染的过程是带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。同时，也会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基，转染后 4-6h在更换成有血清培养基，这其实是为了减轻转染造成的细胞毒性和转染效率的降低。

如何有效提高细胞转染实验效率：1.选择高效的转染方法不同转染试剂有不同的转染方法，但大多大同小异。转染时应跟据具体转染试剂推荐的方法，但也要注意，因不同实验室培养的细胞性质不同，质粒定量差异，操作手法上的差异等，其转染效果可能不同，应根据实验室的具体条件来确定较佳转染条件。2.确保所构建载体的质量。转染载体的构建（细菌载体，质粒DNA，RNA，PCR产物，寡核苷酸等）也影响转染结果。细菌载体对特定宿主细胞传染效率较高，但不同细菌载体有其特定的宿主，有的还要求特定的细胞周期，如逆转录细菌需侵染分裂期的宿主细胞，此外还需考虑一些安全问题（如基因污染）。除载体构建外，载体的形态及大小对转染效率也有不同的影响，如前面提到的超螺旋及线性DNA对瞬时和稳定转染的影响。如果基因产物对细胞有毒性作用，转染也很难进行，因此选择组成或可调控，强度合适的启动子也很重要，同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。选择传代次数较低并处于对数生长期的细胞进行转染。

细胞转染的注意事项：物品(PS)物品，比如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些物品一般对于真核细胞无毒，但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，使物品可以进入细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。所以，在转染培养基中不能使用物品，甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用物品。这样，在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染，不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素，ICIN选择性物品的竞争性克制剂。另外，为了保证无血清培养基中细胞的健康生长，使用比含血清培养基更少的物品量。瞬时表达分析所需的人力和时间比稳定表达少。金华正规细胞高效转染试剂哪里买

细胞转染是完成这一过程的必需步骤。贵阳正规细胞高效转染试剂平均价格

细胞转染实验注意事项：1.如为贴壁生长细胞，一般要求在转染前一日，必须应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜，较好在转染前4h换一次新鲜培养液。2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。3.培养基中的血清在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清的培养基，因为血清会影响复合物的形成。其实，只要在DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清，在转染过程中是可以使用血清的。贵阳正规细胞高效转染试剂平均价格