深圳鼠尾胶原供应商

鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上，pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06X 体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。需要的溶液 ( 均需要 无菌 、 预冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚红用于 pH 指示 )或 10x 培养液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 双蒸水不含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：将200ul生友鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100ul 10xPBS或10x培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。制备鼠尾胶原：手持尾巴，用止血钳夹住鼠尾的，折断尾骨后拉出尾腱。深圳鼠尾胶原供应商

鼠尾胶原的提取步骤：离心胶原溶液(1600rpm，15 min)，取上清；置300 目筛网于滤器（高压灭菌）中，抽滤上清 每600mL 上述粗提液中加100 mL 0.14 mol/L NaOH 溶液，离心(18000 rpm，12 min)，弃上 清，留絮状沉淀；将絮状沉淀转移至锥形瓶中，用0.1 mol/L 的醋酸溶液(200 mL)振摇促其重新 溶解。 胶原醋酸液在-70较低温冰冻两天。 用一次性注射器戳洞封盖冰冻好的含胶原培养皿保鲜膜，真空冷冻干燥呈干棉花样外观（至少24 准确称取配置3mg/mL 的胶原醋酸液，加入消毒过的搅拌子，冷房搅拌数日得絮状胶原。 10. 胶原蛋白凝胶制备预试- 胶原液：5*DMEM：血清：10*HEPES 液=6：2：1：1，充分混匀； 0.5 NaOH调定pH 值至7.2（综合DMEM颜色变化和pH试纸判断。厦门济南鼠尾胶原开盖在超净台上过夜晾干，也可以在室温放置1小时后。

以鼠尾胶原为支架的类似物的建立：探寻建立类似物的培养方法。方法：原代培养人皮肤成纤维细胞，制备鼠尾胶原，将鼠尾胶原溶液、浓缩培养基、NaOH溶液和以血清重悬的成纤维细胞溶液在适当的比例下混合后形成凝胶构建类似物。结果：形成的类似物中成纤维细胞生长状态良好，并且组织块具有一定弹性和抗拉伸能力。结论：①利用鼠尾胶原可以构建类似物，该模型是进行皮肤部位型培养和制作复合皮的关键与基础；②成纤维细胞胶原凝胶复合物有着良好的生物学特性，它是研究成纤维细胞与细胞外基质之间以及细胞之间相互作用的良好模型。

胶原蛋白的应用：1.胶原天然的紧密的纤维结构，使胶原材料显示出很强的韧性和强度，适用于薄膜材料的制备；2.大较胶原被用作制造肠衣等可食用包装材料．其独特之处是：在热处理过程中．随着水分和油脂的蒸发和熔化．胶原几乎与肉食的收缩率一致。而其他的可食用包装材料还没被发现具有这品质；3.由于胶原分子链上含有大量的亲水基团． 所以与水结合的能力很强． 这一性质使胶原在食品中可以用作填充剂和凝胶；4.胶原在酸性和碱性介质中膨胀，这一性质也应用于制备胶原基材料的处理工艺中。用无菌0.006mol/L乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/mL。

鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定：通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化.超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白。通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定.结果 本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯.与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异。研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了较优的鼠尾胶原蛋白提取条件，胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05 mol/L醋酸溶液.结论 为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础。可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。在接种细胞前用无菌的水漂洗。深圳鼠尾胶原供应商

不断搅拌至溶液中白色的絮状物不再析出。深圳鼠尾胶原供应商

鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明：含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。将200ul鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入23ul 10×PBS或10×培养液，混匀(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。深圳鼠尾胶原供应商