徐州唐山鼠尾胶原

实验应用：鼠尾胶原在原代培养耳蜗血管纹边缘细胞中的应用。目的：建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。方法:制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果。结果：自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞，细胞角蛋白18表达阳性，免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征。结论：成功建立了利用自制鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法，并且制作简便,成本低廉。鼠尾胶原醋酸溶解：制备成浓度为0.1%的溶液。徐州唐山鼠尾胶原

胶原蛋白（Collagen）是结缔组织和内脏部位外基质的主要成分，但在皮肤、肌腱、骨骼中分布*为普遍。胶原蛋白在结构和遗传学上被分为不同类型，I型胶原蛋白（Collagen, Type I）结构上是由2个α1链和1个α2链组成的异源多聚体，在37℃中性条件下可形成3股螺旋结构，被普遍用于多种细胞的培养基质，如肝细胞、纤维细胞、脊髓神经节、雪旺氏细胞等。另外，I型胶原蛋白在细胞生长、分化、迁移和组织态的发生等方面也具有重要应用。注意事项：1） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。2） 整个操作请于冰上进行，因室温下鼠尾胶原I可迅速成胶。3） 整个操作请在无菌环境下无菌操作，避免污染以影响细胞生长。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。杭州正规鼠尾胶原供应商鼠尾胶原醋酸溶解：建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底铺上一层氯仿。

鼠尾胶原的提取步骤：离心胶原溶液(1600rpm，15 min)，取上清；置300 目筛网于滤器（高压灭菌）中，抽滤上清 每600mL 上述粗提液中加100 mL 0.14 mol/L NaOH 溶液，离心(18000 rpm，12 min)，弃上 清，留絮状沉淀；将絮状沉淀转移至锥形瓶中，用0.1 mol/L 的醋酸溶液(200 mL)振摇促其重新 溶解。 胶原醋酸液在-70较低温冰冻两天。 用一次性注射器戳洞封盖冰冻好的含胶原培养皿保鲜膜，真空冷冻干燥呈干棉花样外观（至少24 准确称取配置3mg/mL 的胶原醋酸液，加入消毒过的搅拌子，冷房搅拌数日得絮状胶原。 10. 胶原蛋白凝胶制备预试- 胶原液：5*DMEM：血清：10*HEPES 液=6：2：1：1，充分混匀； 0.5 NaOH调定pH 值至7.2（综合DMEM颜色变化和pH试纸判断。

鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项：将培养器皿在室温(25 度左右)下 放置 20 分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是 10PBS， 使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。 B．含细胞的三维胶原的制备（以配制 200ul鼠尾胶原蛋白(5mg/ml)加到（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH 加到胶原溶液中，会由于 NaOH 不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即 混匀。再加入 23ul 10PBS 10培养液，混匀(混匀后pH 左右，如果 PBS 或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用 pH 试纸测试)。加入 760ul 的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放 20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。 注意事项 型在室温下pH 中性时可迅速成胶，在操作过程中要 尽量保持低温。鼠尾肌腱胶原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根据Birkedal-Hansen方法，经过醋酸（HAc）抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备所得。可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。在接种细胞前用无菌的水漂洗。

鼠尾胶原使用方法：1、细胞培养器皿的表面包被以包被浓度为2μg/cm2为例，用无菌0.006mol/L乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/mL。加到相应的培养器皿中，确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面。开盖在超净台上过夜晾干，也可以在室温放置1小时后，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三个月以上的时间。三维胶原凝胶的制备：A、无细胞三维胶原凝胶的制备（以配制1mg/mL三维胶1mL为例）将200μL本品加到置于冰浴的离心管中，加入690μL双蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反过来把12μL0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100μL10×PBS或10×培养液，混匀后立即加到培养器皿中（混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要测定pH值）。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。使胶原纤维在电子显微镜下形成间距为680埃的明暗相间的特征性的横纹结构。深圳鼠尾胶原厂家现货

将无组织纤维、脂肪和多糖残留的鼠尾腱，真空冷冻干燥备用。徐州唐山鼠尾胶原

三维胶原的制备：鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上，pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06X 体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。需要的溶液 ( 均需要 无菌 、 预冷 ):10xPBS( 可含10 mg/L的酚红用于 pH 指示 )或 10x 培养液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 双蒸水A．不含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。徐州唐山鼠尾胶原