鼠尾胶原蛋白I型,用那一种胶原酶可以溶解:1.将胶原加入到0.1M 的醋酸中,制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。2.建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。3.稀释一定数量的胶原溶液。 4.按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。5.从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。如果胶原溶液不是无菌的,这时候可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。 在接种细胞前用无菌的水漂洗。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。开封鼠尾胶原价格
鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明:含细胞的三维胶原的制备(以配制1毫升,1mg/ml三维胶为例):准备好悬浮于培养液的细胞,并放置于冰浴中。将200ul鼠尾胶原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入23ul 10×PBS或10×培养液,混匀(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液,混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后,加入适当体积的细胞培养液,转移到培养箱中培养。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。太原鼠尾胶原哪家好鼠尾胶原为贴附底物人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式的成功建立。
鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料及其制备方法。各个材料及其重量配比为鼠尾胶原蛋白∶聚乙烯醇∶壳聚糖为余量为水,采用冷冻干燥工艺制备。本发明所制备的止血材料主要采用鼠尾胶原蛋白制备,较传统的止血材料不可吸收、容易引起机体过敏、止血效果差等缺点,本发明所制备的止血材料具有人体内可吸收,生物相容性好;止血效果快,具有很强的亲水性;同时可启动血小板的凝聚,一旦血小板凝聚,就可形成血栓,进而促使血浆结块阻止血流。同时,胶原表面的特定区域可以与细胞表面存在的类似纤连蛋白的糖蛋白结合,可以起到防止肠粘连的功效。
鼠尾胶原使用方法:1、细胞培养器皿的表面包被以包被浓度为2μg/cm2为例,用无菌0.006mol/L乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/mL。加到相应的培养器皿中,确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面。开盖在超净台上过夜晾干,也可以在室温放置1小时后,用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三个月以上的时间。三维胶原凝胶的制备:A、无细胞三维胶原凝胶的制备(以配制1mg/mL三维胶1mL为例)将200μL本品加到置于冰浴的离心管中,加入690μL双蒸水,然后加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反过来把12μL0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入100μL10×PBS或10×培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要测定pH值)。将培养器皿在室温放置20min待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。在冰水浴中将粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶胀。
胶原蛋白分离提纯实验方案:提取鼠尾胶原蛋白的实验步骤: 1、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液对初步处理的鼠尾腱进行 酶解, 持续一段时间待混合物变成无色、 透明、 粘稠液体后即可在 4℃, 5000g 的离心力下离心 20min, 收集上清即为粗制鼠尾胶原蛋白原液。 2、将一定浓度的氯化钠溶液加入其中,持续搅拌直至白色絮状沉淀 从溶液中析出,继续加入氯化铵直至沉淀不在析出为止,4℃,5000g 的离心力下离心 20min 后获得白色沉淀。 沉淀物加入一定浓度的醋酸 溶液中溶解。 3、将溶解后的鼠尾胶原蛋白溶液继续反复进行盐析处理,重复步骤 2 的过程 2~4 次。 _x000c_鼠尾胶原蛋白经 SDS- PAGE 蛋白质电泳。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。吸去生理盐水,将尾腱称重(0.5-1克)。开封鼠尾胶原平均价格
鼠尾胶原醋酸溶解:稀释一定数量的胶原溶液。开封鼠尾胶原价格
鼠尾胶原备用胶凝程序:1)在冰上放置以下物品:胶原蛋白I、无菌10×PBS、无菌蒸馏水、无菌1M NaOH。2)确定胶原蛋白I待使用溶液所需的较终浓度的体积。3)在冰上放置无菌管以收存胶原蛋白I。4)在无菌条件下执行以下步骤。4.1加入10×PBS(终体积/10)mL4.2计算要使用的胶原蛋白I的体积(不要添加到管中直到步骤4.6为止)终体积x终胶原蛋白I浓度(mg/mL)。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的胶原体积×0.023)mL的无菌冰冷1M NaOH。4.4向4.3溶液中加入下述体积的无菌冰冷蒸馏水:添加蒸馏水体积=V(终)—V(胶原蛋白)—V(10× PBS)—V(1M NaOH)4.5混合管中的物质并放入冰中。4.6加入胶原蛋白I并计算体积,混匀,冰上备用。5)胶原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小时。6)使用时,无菌条件下将溶液加入到细胞培养装置中37°C凝胶30min。开封鼠尾胶原价格
胶原蛋白的提取方法:酶法提取:酶法提取是利用蛋白酶使胶原溶解,水解条件温和,反应速率快,提取的胶原蛋白仍有完整的三股螺旋结构,蛋白纯度高,理化性质稳定,且无环境污染。酶法提取常用的蛋白酶有:胃蛋白酶、胰蛋白酶或者复合酶。工艺可选择一步法,即利用酶液直接提取;二步法,即先用酸或者碱进行初步提取,然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO预处理革屑,然后用碱性蛋白酶提取胶原的水解产物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶,再用碱性蛋白酶提取了2种不同的胶原水解产物。赵苍碧等[2]采用胃蛋白酶和无花果蛋白酶消化法从牛腱中提取胶原蛋白,探讨了酶和酶的加入量对提取结果的影响,给出了酶对胶原...