鼠尾Ⅰ型胶原:组装液的配置:1.50 mmol/L甘氨酸+200 mmol/L氯化钾 100 mL,用1 mol/L 氢氧化钠调节酸碱度至9.2。2.胶原纤维的重构吸取胶原10μL至小培养皿中,倒入0.5 mL自组装液,室温放置20 min。予自组装液自组装24 h。吸取0.05%戊二醛2 mL至小培养皿中,将自组装24 h的胶原浸泡在戊二醛中。然后将胶原经去离子水、50%乙醇、100%乙醇依次漂洗后进行TEM观察。3.生物矿化形成仿生骨材料静滴配置钙磷矿化液将25mL钙液(10 mmol/L 二水氯化钙+150 mmol/L氯化钠+50 mmol/L三羟甲基氨基甲烷+0.02%三氮化钠)倒入烧杯中,滴入聚丙烯(PAA)至浓度350 μg/mL;滴加1 mol/L的氯化氢,调节酸碱度至7.4,然后缓慢滴入25 mL磷液(6 mmol/L磷酸氢二钠),约16滴/min。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞,细胞角蛋白18表达阳性。宁波正规鼠尾胶原哪里买
胶原蛋白是脊椎动物和无脊椎动物支持结构的主要组成。在人的身体中这是皮肤、筋、软骨、骨骼及结缔组织的较主要的蛋白质。胶原蛋白占人体蛋白质总量的三分之一, 不论来源于哪一种动物或哪一种组织的胶原都有许多共同特性。氨基酸组成中约有三分之一为甘氨酸,有脯氨酸和羟脯氨酸。根据其遗传分子结构遗传基因的差别,胶原蛋白分为20 几个亚型。但较为常见的为Ι、Π、ΙΙΙ型胶原蛋白,即间质胶原蛋白。其中I型较为丰富且品质优良。广州鼠尾胶原厂家批发价鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便。
利用鼠尾Ⅰ型胶原构建与人类自体骨组织化学成分和分子结构相近的仿生骨材料。 方法 通过醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型胶原蛋白,并重构成胶原纤维。然后,将重构后的胶原纤维放置在矿化液中模仿骨生物矿化2~6 d,通过透射电子显微镜和电子衍射观察骨生物矿化。 结果 酸解提取的鼠尾Ⅰ型胶原蛋白能够重构成胶原纤维,并且具有特征性的D-Band结构。透射电子显微镜和电子衍射显示:矿化2 d后,羟基磷灰石钙前体渗入胶原纤维,胶原纤维部分矿化;矿化6 d后,胶原纤维内部完全矿化,形成Ⅰ型胶原蛋白/羟基磷灰石钙的仿生骨材料。 结论 利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型胶原蛋白可以重构成胶原纤维,经矿化可形成与人类自体骨组织化学成分和分子结构一致的仿生骨材料。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。
实验应用:鼠尾胶原在原代培养耳蜗血管纹边缘细胞中的应用。目的:建立利用自制的鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法。方法:制作鼠尾胶原,并观察利用自制的鼠尾胶原所培养出大鼠耳蜗边缘细胞的效果。结果:自制的鼠尾胶原能正常地培养出大鼠耳蜗边缘细胞,细胞角蛋白18表达阳性,免疫组织化学结果和扫描电镜证实所培养的细胞具有典型的分泌上皮细胞特征。结论:成功建立了利用自制鼠尾胶原培养大鼠耳蜗边缘细胞的方法,并且制作简便,成本低廉。鼠尾胶原醋酸溶解:氯仿的量约为胶原溶液的10%。
鼠尾胶原为贴附底物的人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式,为人鼻腔黏液纤毛运输系统的研究提供科学有效的方法。方法制备鼠尾胶原并铺片,以鼠尾胶原为贴附底物组织块培养法培养人鼻腔纤毛上皮细胞,培养7天时进行HE染色及扫描电镜和透射电镜观察细胞形态和结构,应用高速摄像技术测量纤毛摆动频率。结果鼠尾胶原要平坦均匀,平均厚度约为1mm;HE染色可见上皮细胞呈单层向周围爬开;扫描电镜下见纤毛上皮细胞呈不规则多角形,纤毛周围可见微绒毛;透射电镜下可见纤毛上皮细胞间为紧密连接;同一细胞任意两点纤毛摆动频率是相同的;同一来源体外培养的钩突和下鼻甲的纤毛摆动频率是相同的。结论以鼠尾胶原为贴附底物人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式的成功建立,为今后研究鼻内用药对纤毛除去功能的影响提供了良好的方法和途径。将无组织纤维、脂肪和多糖残留的鼠尾腱,真空冷冻干燥备用。芜湖鼠尾胶原哪家便宜
称取胃蛋白酶加入到胶原溶胀液中。宁波正规鼠尾胶原哪里买
鼠尾胶原的生物矿化和TEM观察:果冻样Ⅰ型胶原蛋白胶体初始浸泡在矿化液中时呈微白色;矿化2 d后,胶体的颜色逐渐加深至乳白色;矿化6 d后,随着羟基磷灰石晶体矿化长入胶原纤维内部,胶体颜色加深至纯白色,并在胶体表面沉积了一层薄薄的羟基磷灰石钙晶体,予镊子夹起,其表层羟基磷灰石钙晶体破碎散落。TEM表征显示:矿化2 d后,Ⅰ型胶原纤维的明暗相隔周期性条纹结构逐渐模糊,羟基磷灰石钙前体渗入胶原纤维内部,胶原纤维部分矿化,沿着胶原纤维生长,忖度变深;矿化6 d后,Ⅰ型胶原纤维的明暗相隔D-Band结构完全消失,胶原纤维内部可以看到黑色羟基磷灰石晶体,嵌入胶原纤维纵向生长。当鼠尾Ⅰ型胶原纤维完全矿化时,由于整条胶原纤维都被羟基磷灰石钙晶体占据,胶原纤维呈现黑色,选区衍射斑图符合羟基磷灰石表征。宁波正规鼠尾胶原哪里买
胶原蛋白的提取方法:酶法提取:酶法提取是利用蛋白酶使胶原溶解,水解条件温和,反应速率快,提取的胶原蛋白仍有完整的三股螺旋结构,蛋白纯度高,理化性质稳定,且无环境污染。酶法提取常用的蛋白酶有:胃蛋白酶、胰蛋白酶或者复合酶。工艺可选择一步法,即利用酶液直接提取;二步法,即先用酸或者碱进行初步提取,然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO预处理革屑,然后用碱性蛋白酶提取胶原的水解产物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶,再用碱性蛋白酶提取了2种不同的胶原水解产物。赵苍碧等[2]采用胃蛋白酶和无花果蛋白酶消化法从牛腱中提取胶原蛋白,探讨了酶和酶的加入量对提取结果的影响,给出了酶对胶原...