人体内多种细胞及体液均可分泌外泌体,包括内皮细胞、免疫细胞、血小板、平滑肌细胞等。当其由宿主细胞被分泌到受体细胞中时,外泌体可通过其携带的蛋白质、核酸、脂类等来调节受体细胞的生物学活性。外泌体介导的细胞间通讯主要通过以下三种方式:一是外泌体膜蛋白可以与靶细胞膜蛋白结合,进而启动靶细胞细胞内的信号通路。二是在细胞外基质中,外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合,从而启动细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合,非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。早先应用于从血清等样本中收集细菌,现在也被用来沉淀外泌体,其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。宁波正规外泌体提取试剂厂家推荐
外泌体的组成:外泌体主要含有融合蛋白和转运蛋白、热休克蛋白(HSP70)、CD类蛋白以及磷脂酶和其他脂质相关蛋白,但是不同来源的外泌体的组成有差异。外泌体的提取方式:1、离心法:此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足。2、过滤离心:这种操作简单、省时,不影响外泌体的生物活性,但同样纯度不足。3、密度梯度离心法:用此种方法分离到的外泌体纯度较高,但是前期准备工作繁杂。4、免疫磁珠法:这种方法可以保证外泌体形态的完整,特异性高、操作简单,但生理性盐浓度会影响外泌体生物活性。5、色谱法:此种方法分离出的外泌体大小均一,但设备特殊,应用不普遍。昆明正规外泌体提取试剂厂家推荐目前人们多采用超速离心、免疫磁珠、超滤、沉淀或试剂盒等方法实现外泌体的提取分离。
有的外泌体分离方法需要高速离心,需要使用大型机器,耗费近24小时的时间才能获得,非常不便。而高离心力也可能破坏囊泡。降低样品的质量。这项研究有望解决这一难题。在论文中,研究人员们提供了一种通过微流体和声学的独特组合从体液样品中捕获外泌体的新颖方法。他们开发的原始声学分选装置由两个倾斜的声学换能器和一个微流体通道组成,当这些传感器产生的声波相互碰撞时,形成产生一系列压力节点的驻波。每当细胞或颗粒流过通道并遇到一个节点时,压力会将细胞引导离开中心一点点。细胞移动的距离取决于大小和其他属性(如可压缩性),这样,当到达通道末尾时,不同大小和性质的细胞就能够被分离开来。这种方法分离得到的外泌体,基本上不改变其生物或物理特征,为开发评估人类健康以及疾病诊断和进展提供了有吸引力的新方法。
外泌体与肺病预后:在当代精细医疗的大趋势下,外泌体的发现和研究为肺病的早期诊断和治病提供了崭新的方向。外泌体在液体活检中的巨大潜力可以为肺病患者的早期发现和早期诊疗提供可靠依据。根据一些病症来源的外泌体在肺病的发生的发展和侵袭转移过程中的作用及相关机制的研究,临床医疗人员可以针对不同的患者制定较合适的治病方案,以达到改善肺病患者生存率,延长肺病患者生存时间的目的。但是,针对外泌体的研究还存在诸多的问题有待广大研究者解决,如:外泌体的纯化及标记方法、如何寻找外泌体的靶基因、外泌体的作用机制及信号通路等。总而言之,外泌体的研究有着广阔的前景,基于外泌体与肺病的研究,有望研发出能够应用于肺病临床诊断和治病的有效措施,造福更多的患者。通过超速离心(120000g/分钟)20小时以上才能获得足够的外泌体量。
外泌体鉴定:外泌体分离之后,需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。鉴定方法从物理特征到表面分子标志物,多角度进行鉴定。l透射电镜鉴定法:简称TEM,适合外泌体双层囊膜超微结构观察,即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。l纳米颗粒追踪分析法:简称NTA,该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快,检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。lWesternblot分子标志物检测:外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族,如CD9、CD63和CD81;细胞质蛋白,如肌动蛋白(Actin)和钙磷脂结合蛋白(Annexins);严重阻碍了我国在外泌体的研究和临床应用上的发展。贵阳正规外泌体提取试剂厂家供应
利用不同截留相对分子质量(MWCO)的超滤膜对样品进行选择性分离,便可获得外泌体。宁波正规外泌体提取试剂厂家推荐
外泌体与肺病预后:外泌体mirRNA和蛋白质被认为是NSCLC的预后因子。Dejima等在研究NSCLC患者预后的生物标志物时发现,外泌体miR-4257和miR-21的含量显着上升。此外,还有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者较高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的复发率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血浆的外泌体时发现,NY-ESO-1是其中对低生存率有显着影响的标志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系统分析了28位NSCLC患者体内的365种miRNA,其中let-7f、miR-30e-3p和miR-20b表达均下调,进一步研究发现,let-7f和miR-30e-3p水平可以区分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p与不良预后密切相关。宁波正规外泌体提取试剂厂家推荐
在这项新的研究中,经过基因修饰的外泌体(被称作iExosome)能够运送特异性地靶向KRAS突变基因的小RNA分子,从而导致胰腺病模式小鼠病情缓解,增加它们的总存活率。这些研究人员采用了一种被称作RNA干扰(RNAi)的靶向方法:利用这些天然的纳米颗粒(即外泌体)运送小干扰RNA(siRNA)或短发夹RNA(shRNA)分子来靶向胰腺病细胞中的KRAS突变基因,从而影响多种胰腺病模型的一些病症负荷和存活。他们证实外泌体能够作为一种高效的RNAi载体发挥作用,这是因为这些纳米大小的囊泡(即外泌体)轻松地在体内迁移和进入靶细胞(包括病细胞)中。通过过滤膜对上述体液样本进行过滤,进一步去除体液中的细...