糖原染色 用于鉴别淋巴系统细胞增生的性质鉴别红细胞系统增生的性质[英文缩写]PAS[参考值]正常人淋巴细胞PAS反应积分正常人幼红细胞PAS反应积分[临床意义]恶性淋巴瘤、急慢性淋巴细胞白血病时PAS积分升高巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、再障贫血时幼红细胞PAS反应多为阴性红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征时幼红细胞PAS反应积分可40甚至高达100--200以上用于不典型巨核细胞与李-斯细胞的鉴别前者PAS反应为强阳性后者为阴性或弱阳性;用于高雪细胞和尼曼一匹克细胞的鉴别前者PAS反应为强阳性而后者反应为阴性或弱性。将动物杀死后迅速取出所需要的组织。湖南糖原染色试剂盒销售厂家
糖类染色实验——糖原染色:高碘酸氧化液:高碘酸 0.5 g,蒸馏水 100 ml。此液溶解后放入冰箱中待用。Schiff 染色液:碱性复红 1 g,1mol/L 盐酸 20 ml,焦亚硫酸钠(偏重亚硫酸钠)2 g,双重蒸馏水 200 ml。先将 200 ml 双重蒸馏水煮沸,稍有火焰,加入 1 g 碱性复红,再煮沸 1 min,冷却至 50℃ 加入 20 ml1mol/L 盐酸,待 35℃ 时加入 2 g 焦亚硫酸钠。室温中 2 h 之后见稍带红色,5 h 之后变为无色液体。棕色瓶内装好,放入冰箱中保存待用。1. 石蜡组织切片,常规脱蜡至水。2. 蒸馏水洗 2 次。3. 高碘酸氧化液处理 10~20 min。4. 充分蒸馏水洗。5. Shciff 液染色,染色 10~20 min(如果室温在 15℃ 以下时,可在湿盒内加入温水而加快反应)。6. 流水冲洗 3 min(对于着色较深的切片可适当缩短时间)。7. 用 Mayer 明矾-苏木**染细胞核 3~5 min。8. 0.5% 盐酸乙醇液分化 30s,自来水浸洗 2 min。上海咨询糖原染色试剂盒直销价遇醋酸发生沉淀,胃粘蛋白则除外。
糖原染色在使用过程中需要注意以下几个方面:Schiff氏染液的配制是关键,尤其是偏重亚硫酸钠的质量,打开应是粉剂,且带有硫的气味,若成团或没有气味,则不能用,配制时使用的容器、药勺、称药天平与称药纸等必须洁净、无污染。新配制好的Schiff剂为无色透明液体[1],配好后可分成小份置于-20℃保存,用时取一份恢复到室温即可。沈洪武等通过对比染色发现,冷冻保存1年的Schiff液的染色结果与新鲜配制的染色结果一致[5]。0.5%~1%高碘酸(pH值在3.0~5.0之间),环境温度以不高于20℃为宜,室温高时氧化时间适当缩短;如果染色时环境温度较高且高碘酸作用时间长,可使某些物质成分发生非特异反应,使染色结果出现假阳性。因此,室温较高时可适当缩短反应时间。
糖原染色在使用过程中需要注意以下几个方面:尽可能选取小块新鲜组织及时固定。糖原易溶于水,在酶的作用下很容易分解葡萄糖,更易溶于水,固定之前决不能用水或生理盐水等浸洗。应避免用水溶性固定液,宜采用酒精性固定液,如Carnoy液,能较好地保存糖原,但有使糖原流动到细胞一侧的现象,多数人认为是由于固定剂把细胞内的糖原推向固定剂对组织浸透的方向而造成。其他组织应用中性福尔马林固定为佳。组织在4℃左右温度内固定与保存,是针对糖的性质和避免糖原溶于水而采取的相应措施。乙醇能沉淀白蛋白、球蛋白,亦能**白和糖原沉淀,但仍可溶于水,因此较好不单独使用乙醇固定,以乙醇为溶剂的混合固定液固定为佳。一般厚度不超过3mm,大小不超过5×5m㎡。
糖原染色(PAS):(1)原理:过碘酸将血细胞内的糖原氧化,生成醛基。醛基与雪夫液中的无色品红结合,形成紫色化合物,定位于细胞质中。(2)操作方法:干燥涂片,滴加甲醛固定液固定10分钟,流水冲洗,晾干。滴加过碘酸溶液作用20分钟,流水冲洗,晾干。滴加雪夫液作用60分钟,流水冲洗,晾干。滴加甲基绿溶液复染10分钟,流水冲洗,晾干镜检。(4)临床意义:根据染色阳性程度和阳性物形态鉴别主要用于急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病鉴别,还有助于红白血病与巨幼细胞贫血和溶血性贫血的鉴别诊断。取材必须新鲜,这一点对于从事细胞生物学研究尤为重要。北京正规糖原染色试剂盒
过碘酸氧化时间不宜过久,氧化时的温度以18~22℃佳。湖南糖原染色试剂盒销售厂家
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糖原染色:方法固定液Carnoy固定液:纯酒精60ml冰醋酸10ml氯仿30ml,也可以选用75%酒精配制1)过碘酸酒清夜配法:过碘酸(HIO.2HO)0.4g95%酒精35mlM/5醋酸钠(2.72g+蒸馏水100ml)5ml蒸馏水10ml保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周.2)Schiff氏液:0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶5分钟,使之充分溶解.冷却至50℃后过滤加入10毫升1N盐酸.冷却至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存.3)Schiff氏酒**配置Schiff氏液11.5ml1NHCI0.5ml纯酒精23ml4)亚硫酸...