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1983年，外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体目前被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日益增长，无论是研究其功能还是了解如何将其用于微创诊断的开发。如何高效地提取外泌体是实现这项新兴液体活检技术临床常规化应用的关键。一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标。宁波正规外泌体提取试剂推荐厂家

外泌体作为近几年来的研究热点，受到了科研工作者的青睐及追捧。由于外泌体内携带有大量的miRNA,少量lncRNA,Mrna以及DNA蛋白质成为液体活检的潜力无限的研究对相。所以，获得纯度高、内容物完整的外泌体非常之重要，那么，外泌体的提取方法也显得尤为重要。一、差速离心法差速离心法可以说是传统普遍的外泌体提取方法。原理是：首先低速离心以除去细胞和细胞凋亡碎片；随后，高速离心以去除大囊泡；高速离心以沉淀外泌体。苏州君欣生物科技有限公司无锡外泌体提取试剂哪家便宜外泌体提取：小分子可进入凝胶中绝大部分孔洞，在柱中受到更强地滞留，更慢地被洗脱出。

外泌体的提取、分离方法：尺寸排阻色谱法和超滤法；尺寸排阻色谱法是利用分子筛理论，较初是根据蛋白质分子大小分离蛋白质的色谱技术。该方法的主要优点是不需要很大的离心力，从而保证了外泌体的完整性。Mol等[13]对比超高速离心和尺寸排阻色谱法得到的外泌体蛋白，结果显示，后者得到的外泌体的蛋白丰度高于前者。这些基于过滤或尺寸排阻色谱的新方法为外泌体大规模的生产和临床应用提供了可能。超滤也是根据外泌体的尺寸将其分离出来的一种方法，超滤一般被认为是外泌体分离过程中的一个准备过程，通过超滤除去大分子和小分子的蛋白质。不过连续的超滤可以分离出外泌体，和超高速离心相比，超滤不需要特殊的设备就可以较短时间内分离出外泌体。但是，超滤膜对外泌体的黏附作用会降低外泌体的产量，并且超滤过程中施加的外力可能会使外泌体变形或者破裂。

有的外泌体分离方法需要高速离心，需要使用大型机器，耗费近24小时的时间才能获得，非常不便。而高离心力也可能破坏囊泡。降低样品的质量。这项研究有望解决这一难题。在论文中，研究人员们提供了一种通过微流体和声学的独特组合从体液样品中捕获外泌体的新颖方法。他们开发的原始声学分选装置由两个倾斜的声学换能器和一个微流体通道组成，当这些传感器产生的声波相互碰撞时，形成产生一系列压力节点的驻波。每当细胞或颗粒流过通道并遇到一个节点时，压力会将细胞引导离开中心一点点。细胞移动的距离取决于大小和其他属性（如可压缩性），这样，当到达通道末尾时，不同大小和性质的细胞就能够被分离开来。这种方法分离得到的外泌体，基本上不改变其生物或物理特征，为开发评估人类健康以及疾病诊断和进展提供了有吸引力的新方法。机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等，因此发表文章时易受质疑。

外泌体的形成与鉴定：首先，细胞膜内陷形成一个杯状结构，包括细胞表面蛋白和与细胞外环境相关的可溶性蛋白，导致早期胞内体(early-sortingendosome，ESE)的从头形成，或者是杯状结构直接和已经存在的ESEs融合；trans-高尔基体和内质网也能协助形成ESEs。ESE成熟后形成晚期胞内体(late-sortingendosomes，LSEs)，较终形成MVBs(也称为多囊内小体)。MVBs是通过endosome限制膜向内凹(即质膜双凹)形成的，这一过程导致MVBs含有多个ILVs。MVB可以与溶酶体或自噬体融合，较终降解或与质膜融合释放作为外泌体的ILVs。外泌体表面蛋白包括四聚体蛋白、整合蛋白、免疫调节蛋白等。外泌体可以包含不同类型的细胞表面蛋白、细胞内蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代谢物。使用可截留100KD分子量的膜，通过离心截留上清中的外泌体，截留完成后使用PBS对膜进行洗脱即得到外泌体浓缩液。合肥外泌体提取试剂生产厂家

可将外泌体吸附并分离出来。宁波正规外泌体提取试剂推荐厂家

外泌体鉴定：外泌体分离之后，需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。鉴定方法从物理特征到表面分子标志物，多角度进行鉴定。l透射电镜鉴定法：简称TEM，适合外泌体双层囊膜超微结构观察，即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。l纳米颗粒追踪分析法：简称NTA，该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快，检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。lWesternblot分子标志物检测：外泌体标志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；细胞质蛋白，如肌动蛋白（Actin）和钙磷脂结合蛋白（Annexins）；宁波正规外泌体提取试剂推荐厂家

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