鼠尾胶原为贴附底物的人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式,为人鼻腔黏液纤毛运输系统的研究提供科学有效的方法。方法制备鼠尾胶原并铺片,以鼠尾胶原为贴附底物组织块培养法培养人鼻腔纤毛上皮细胞,培养7天时进行HE染色及扫描电镜和透射电镜观察细胞形态和结构,应用高速摄像技术测量纤毛摆动频率。结果鼠尾胶原要平坦均匀,平均厚度约为1mm;HE染色可见上皮细胞呈单层向周围爬开;扫描电镜下见纤毛上皮细胞呈不规则多角形,纤毛周围可见微绒毛;透射电镜下可见纤毛上皮细胞间为紧密连接;同一细胞任意两点纤毛摆动频率是相同的;同一来源体外培养的钩突和下鼻甲的纤毛摆动频率是相同的。结论以鼠尾胶原为贴附底物人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式的成功建立,为今后研究鼻内用药对纤毛除去功能的影响提供了良好的方法和途径。胶原蛋白就像骨骼中的一张充满小洞的网,它会牢牢地留住就要流失的钙质。南昌正规鼠尾胶原厂家供应
胶原蛋白的应用:1.胶原天然的紧密的纤维结构,使胶原材料显示出很强的韧性和强度,适用于薄膜材料的制备;2.大较胶原被用作制造肠衣等可食用包装材料.其独特之处是:在热处理过程中.随着水分和油脂的蒸发和熔化.胶原几乎与肉食的收缩率一致。而其他的可食用包装材料还没被发现具有这品质;3.由于胶原分子链上含有大量的亲水基团.所以与水结合的能力很强.这一性质使胶原在食品中可以用作填充剂和凝胶;4.胶原在酸性和碱性介质中膨胀,这一性质也应用于制备胶原基材料的处理工艺中。杭州成都鼠尾胶原鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验长时程的记录。
鼠尾胶原蛋白I型,用那一种胶原酶可以溶解:1.将胶原加入到0.1M的醋酸中,制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。2.建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。3.稀释一定数量的胶原溶液。4.按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。5.从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。如果胶原溶液不是无菌的,这时候可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。在接种细胞前用无菌的水漂洗。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。
鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶3种基质对角膜上皮细胞增殖的影响:目的探讨鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶3种基质对体外培养角膜上皮细胞增殖的影响。方法采用鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶作为基质包被培养器皿,以普通培养器皿作对照,培养角膜上皮细胞,观察细胞形态,进行细胞计数并描绘细胞生长曲线,比较不同基质对角膜上皮细胞的增殖作用。结果使用基质包被的培养器皿培养角膜上皮细胞,细胞增殖速度较普通组快,细胞形态、活力和长势比普通组更佳,促进增殖的能力为鼠尾胶原多聚赖氨酸明胶。结论鼠尾胶原可促进角膜上皮细胞增殖,且增殖效果优于多聚赖氨酸和明胶。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。结果无鼠尾胶原时,前庭毛细胞悬浮于外液,不宜封接。
鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明:不含细胞的三维胶原的制备(以配制1毫升,1mg/ml三维胶为例):将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中,加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中,会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结),立即混匀。再加入100ul10×PBS或10×培养液,混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH为7左右,如果PBS或培养液中没有加酚红,初次使用时需要用pH试纸测试)。将培养器皿在室温(25度左右)下放置20分钟待胶凝固后,转移到培养箱内。如果配制中使用的是10×PBS,使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。鼠尾I型胶原蛋白系采用方法在无菌下制备,纯度达到95%以上。青岛正规鼠尾胶原价格
吸去生理盐水,将尾腱称重(0.5-1克)。南昌正规鼠尾胶原厂家供应
鼠尾胶原凝胶体在皮肤细胞原代培养中的应用:在国外的药理,毒理和皮肤病学的研究领域中已得到的限翩,否则培养成功率极低.本文采用鼠尾胶原凝胶体作为滋养层,提高了培养细胞的材料和方法r1]实验材料:培养液DEIdE(G皿}ao),表皮细胞生长因子(EGFSigma),小牛血清(上海祟明生物制品厂),氢化可的松,胰岛素(Sigm,青,链霉素,胰蛋白酶,]~DTA,细胞培养皿~35mill(00rningrSA).(2)皮肤基底细胞的分离和细胞悬液的制备:2~3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮肤,剪下皮肤后.以消化12h.轻刷表皮面,收集细胞悬液,加入细胞培养液.用梯度离心收集细胞,以3xi0/m]浓度接种平皿.(3)鼠尾胶原凝胶体的制备:具体方法参见文献c13o(4)培养皿的胶原铺制:i.0ml的酸溶解胶原滴入~35mm培养皿中,铺满平皿底部;将平皿暴露于氨气中30min,然后置空气中30rain,散尽剩余氨气。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。南昌正规鼠尾胶原厂家供应
胶原蛋白的提取方法:酶法提取:酶法提取是利用蛋白酶使胶原溶解,水解条件温和,反应速率快,提取的胶原蛋白仍有完整的三股螺旋结构,蛋白纯度高,理化性质稳定,且无环境污染。酶法提取常用的蛋白酶有:胃蛋白酶、胰蛋白酶或者复合酶。工艺可选择一步法,即利用酶液直接提取;二步法,即先用酸或者碱进行初步提取,然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO预处理革屑,然后用碱性蛋白酶提取胶原的水解产物。CabezaL.F.T等[7]先用胃蛋白酶,再用碱性蛋白酶提取了2种不同的胶原水解产物。赵苍碧等[2]采用胃蛋白酶和无花果蛋白酶消化法从牛腱中提取胶原蛋白,探讨了酶和酶的加入量对提取结果的影响,给出了酶对胶原...