实验室及中试放大规模蛋白纯化系统 Unique Autopure系列蛋白纯化系统 主要应用领域 : – 蛋白纯化系统主要应用于单抗、重组蛋白、疫苗、生化 药、、天然产物和多糖等生物制药领域。用于生物制品的下游工艺的分离纯化。 Unique AutoPure 系列蛋白纯化系统 : 产品特点及优势: – 模块化设计,提供多个配置,满足特殊工艺流程需求 - 低脉动高精度双柱塞输液泵 ,保证优异的分离重现性 ; – 全系统与液体接触的地方均由生物兼容性材料组成、符合FDA、USP VI等相关法规要求 ; – DAD全谱直读检测器,避免了传统的机械切换式检测器所带来的不稳定性及高故障率 ; – 固定波长检测器灯为长寿命LED灯,寿命大于8000小时,降低维护成本 ; – 专利技术紫外检测器流通池,低死体积、低峰拓展,提高了色谱分离度 ; – 高灵敏度在线pH、电导率、紫外检测器,低死体积、低峰拓展,提高了色谱分离度 ; – 集中了buffer选择阀,自动进样阀、柱位阀等自动化组件,提高了纯化的自动化程度 ; – 具有柱前、柱后、压差报警,气泡传感器检测等功能,极大的保护了系统及层析柱的安全性 ; – 层析工作站软件是一款功能强大、性能先进、高稳定性的色谱数据管理系北京蛋白纯化系统制造厂家
三、蛋白质分子量的测定 蛋白质分子量测定的方法很多,目前常用的方法有以下几种。 3.1 凝胶过滤法 凝胶过滤法测定蛋白质分子量的原理如“分离纯化方法”中所 述。一定型号的凝胶颗粒上具有一定大小的孔隙,只允许较小的分子进入胶粒,而大于孔隙的分子则不能进入胶粒而被排阻在胶粒外面。用洗脱液洗脱时,被排阻的分子量大的蛋白质先被洗脱下来,随后能够进入颗粒的蛋白质也按分子量大小而先后被洗脱下来,分子量越小的越后被洗脱下来。由于不同排阻范围的葡聚糖凝胶有一特定的蛋白质分子量范围,在此范围内,分子量的对数和洗脱体积之间成线性关系。因此,用几种已知分子量的蛋白质为标准进行层析分析,以每种蛋白质的洗脱体积对它们的分子量的对数作图,绘制出标准洗脱曲线。未知蛋白质在同样的条件下进行层析分析,根据其所用的洗脱体积,从标准洗脱曲线上可求出此未知蛋白质对应的分子量来。北京蛋白纯化系统制造厂家
蛋白质分离纯化步骤(二) 2.4 样品的进一步分离纯化 用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质,须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有:凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。 1. 凝胶过滤层析 凝胶过滤层析(gel-filtration chromatography)又称为分子排阻层析或分子筛层析。它是将葡聚糖凝胶(Sephadex)装入一个柱子中,制成凝胶柱。这种凝胶颗粒具有网状结构,不同类型凝胶的网孔大小不同。当把蛋白质混合样品加到凝胶柱中时,比凝胶网孔小的蛋白质可进入网孔内,而大于网孔的分子则不能进入被排阻在凝胶颗粒之外。当用洗脱液洗脱时,被排阻的分子量大的蛋白质直接通过凝胶之间的缝隙先被洗脱下来,而比网孔小的蛋白质可连续不断地进入网孔内。这样的小分子不但流经的路程长,而且受到来自凝胶内部的阻力也很大,所以蛋白质越小,从柱子上洗脱下来所需时间越长。由于不同蛋白质的分子大小不同,进入网孔的程度不同,因此流出的速度不同,洗脱所用体积及时间不同,从而达到分离的目的。
三、蛋白质分子量的测定 3.3 沉降法 沉降法又称超速离心法。蛋白质溶液在受到强大的离心力作用时,蛋白质分子趋于下沉,沉降速度与蛋白质分子的大小、密度和分子形状有关,也与溶剂的密度和粘度有关。蛋白质颗粒在离心场中的沉降速度用每单位时间内颗粒下沉的距离来表示。 在离心场中,蛋白质分子所受到的净离心力(离心力减去浮力)与溶剂的摩擦力平衡时,每单位离心场强度的沉降速度称为沉降系数(Sedimentation Coefficient)。国际上采用Svedberg单位作为沉降系数的单位,用S表示,以纪念超速离心法的创始人,瑞典***的蛋白质化学家T.Svedberg。一个Svedberg单位(或直接称一个S)为1×10—13s。蛋白质的沉降系数大约在1×10—13~200×10—13s范围内,即1S~200S。
蛋白质纯化方法-亲和层析亲和层析法包括特异性配体亲和层析法以及通用性配体亲和层析法。比较这两种亲和层析法。特异性配体亲和层析法通常将复杂的生命大分子物质作为配体,它的结合力比较大河吸附选择性比较强。而通用性配体亲和层析法通常将简单的小分子物质作为配体,因此,它具有低廉的成本,吸附容量比较高,通过对吸附和脱附条件的改善能够使得层析的分辨率提高。原理亲和层析的原理类似于酶-底物,***-受体与抗原-抗体等特异性反应的机理。有一定的亲和力在每对反应物之间。与在酶与底物的反应中,只有特异的底物才可以结合一定的酶,使复合物产生相同。在亲和层析中,只有特异的配体才可以和一定的生命大分子有亲和力,并且使复合物产生。亲和层析配体呈固相,而酶与底物的反应底物呈液相是它们的不同点。事实上,亲和层析是在含有活化基团的基质M上以共价键的方式固化具有识别能力的配体L,将固相载体制作成功而固化后的配体束缚特异物质的能力依然保持。所以当在小层析柱装入固相载体,使得欲分离的样品在该柱经过。此时,样品中对配体有亲和力的物质S就能够通过结构互补效应、范德瓦尔力与静电引力等作用在固相载体上吸附着。 北京蛋白纯化系统制造厂家
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仪器仪表是用以检出、测量、观察、计算各种物理量、物质成分、物性参数等的器具或设备。真空检漏仪、压力表、测长仪、显微镜、乘法器等均属于仪器仪表。近年来,得益于机械、冶金、石化行业等仪器仪表服务领域经营状况的好转,我国仪器仪表制造业发展一路向好。仪器仪表在工业生产过程中扮演着重要的角色,用到各种各样的仪器仪表,如蛋白纯化色谱系统,凝胶净化色谱系统,制备液相色谱,柱塞泵等为工业的检验、测量和计量提供技术支撑。机器人与自动化设备、机械电子设备的研发、生产、销售及技术咨询;光学检测设备、光电产品研发、制造、销售;实验室设备、仪器仪表的研发、制造、销售及提供相关的技术咨询和售后服务;自营和代理各类商品及技术的进出口业务(限定企业经营或禁止进出口的商品和技术除外)。(依法需经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动)产品普遍运用于工业、农业、交通、科技、环保、**、文教卫生、大家生活等各个领域,在旺盛市场需求的带动下和我国宏观调控政策的引导下,我国仪器仪表行业的发展有了长足的进步空间。尽管在我国相关政策的引导和支持下,我国仪器仪表行业得到了飞速发展。但是从加工整体上看,我国的仪器仪表行业还是落后于国际水平的。重点技术缺乏、高精尖产品严重依赖进口、仪器仪表产品同质化严重、生产工艺落后、研发能力弱、精度不高等问题的凸显,为仪器仪表行业的发展带来了严峻的挑战。北京蛋白纯化系统制造厂家
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