Q:A如何对超滤管进行去除内不好的物质的处理?
A:提 供 的 超 滤 管 是 没 有 经 过 去 内 不好的物质 处 理 的,同 时 由 于 内 不好的物质 通 常 以 多 聚 体 的 形 式 存 在,大 小 在10-1000KD之间不等,在超滤的过程中是无法去除的。可在实验前通过先用0.5M NaOH预清洗,随后用Milli-Q® 水/缓冲液清洗的步骤去除大部分内不好的物质。关于针对Amicon®,Microcon®, Centricon® 尝试过的内不好的物质去除方案
Q:怀疑浓缩过程中目的蛋白和超滤膜之间可能存在非特异性吸附,如何改善?A:Amicon® Ultra超滤管使用的是再生纤维素膜,这种材质是蛋白吸附较低的超滤膜。但是对于一些疏水性蛋白或非极性蛋白,它们和膜的非特异吸附可能会增强。对于这种情况,可以尝试在实验前对超滤管进行封闭处理,。也可以尝试换成Amicon® Ultra 0.5或2来进行实验,通过减小膜面积来降低非特异性吸附。
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直接称重程序
大多数稀释蛋白的密度与水的密度大致相同 (即1 g/mL)。 利用这一特性,可通过称取浓缩液与滤过液重量并将其单位从克转化成毫升的方法,对其进行量化。 本方法适用于浓度不超过或约为20 mg/mL的溶液。
1. 使用之前,分别称取空的过滤装置、离心管和空的浓缩液收集管的重量。
2. 在过滤装置中加入溶液,然后重新称重。
3. 按说明组装装置和离心机。
4. 用移液管收集浓缩液,然后将其注入到已经预先称重的浓缩液收集管。
5. 从离心管上取下装置,然后称取离心管和浓缩液收集管的重量。
6. 减去空的装置/试管的重量,计算初始材料、滤过液及浓缩液的重量。
7. 化验初始材料、滤出液及浓缩液,以确定溶质浓度。
8. 使用重量/体积数据及所测出的浓度来计算回收量
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应用如果将压力罐与一个外部的压力源连接,压力罐中盛有 的液体便可通过 Merck Millipore 加压过滤器而得到过滤。 罐符合ASME-UM规范要求。密封盖用凸轮锁定手柄密封。 排气后可高温高压灭菌。附件压力释放阀、压力表和软 管接头符合法规规定。附件密封盖可保证压力罐在真空 环境下使用。应用用于真空过滤少量样品,进行颗粒或 生物污染物分析。提供熔结玻璃支撑 件或不锈钢支撑网。厚型预过滤膜或 带衬垫的滤膜不能密封在此过滤器 中。建议在溶剂过滤中使用 Durapore (PVDF)滤膜或不带衬垫的 PTFE 膜。警告 : 禁止与易燃性液体配合使用, 以免受伤。 装有滤膜的换膜过滤器不能高温高压 灭菌。
Isopore 表面滤膜是在聚碳酸酯表面经 过蚀刻而成,推荐用于所有需要在滤 膜表面观察样品的分析。Isopore 表面 滤膜具有独特的适用性,通过光学或 电子显微镜技术对空气中的污染物及 其它颗粒进行观察分析。Isopore 表面 滤膜由聚碳酸酯膜组成,具有光滑的, 像玻璃一样的表面,可以进行清晰的 样品观察。该表面滤膜独有的生产工 艺保证了精确均一的孔径,可进行精 确的依据孔径的分离。Isopore 表面滤 膜不会污染,具有很低的背景干扰。 在绝大多数透射显微镜应用中无需进 行清洗。因为焦油和灰份重量低且稳 定,所以通常不需要重量配对滤膜。 Isopore 表面滤膜是不吸湿的,可以很 快干燥,缩短样品分析时间。Millipore无菌针头式过滤器。
Q:浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白,可能的原因有哪些?
A: 首先,Amicon® Ultra超滤管的蛋白较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次,如果问题仍然出现,请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因:
1)a
如果目的样本在滤过液中,那么请排查:
) 是否选择了合适截留分子量的超滤管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)?
b)使用的离心力是否是在限定范围内?如果使用的是rpm,请换算成相应的g离心力,具体换算方法请垂询。
c)离心机较近是否有校准过?
d)是否尝试这个蛋白?如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话,那么有可能是这个目的
蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响浓缩效果,建议选用更小截留分子量的超
滤管(如原本选用30k,此时可以选择10k)。
2)a
如果目的样本也不在滤过液中,那么:
)蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL? b)用来确定样本浓度的方法是什么?是否可信?
c)目的蛋白是不是沉淀了?如果是,具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。
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Amicon® Pro能做到一步离心完成脱盐换液蛋白缓冲液置换、脱盐和透析样品的特点和制备要求 Amicon® Pro 系统 Amicon® Ultra 超滤管 D-Tube™ 透析管快速操作 ~20 分钟 <1 小时 5 小时敏感样品,在高浓度时容易出现沉淀 适合使用 不适合使用 适合使用透析后浓缩 适合使用 适合使用 不适合使用置换的缓冲液量比较有限 适合使用 适合使用 不适合使用
Microcon® DNA Fast Flow 超滤管,专门设计用于从含有SDS的溶液中浓缩和回收基因组DNA。管子和膜均为低非特异性吸附的材质,医用级O型圈密封,保证了在洗涤步骤中样品丢失较少。反转回收设计,即使样品量很小也能获得理想的得率,浓缩倍数可以达到20X。 山东纯水机耗材Millipore密理博使用
上海登宁科技有限公司总部位于上海外高桥保税区美桂北路378号,是一家从事生物科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,橡塑制品、实验室设备、仪器仪表、机电设备、汽车配件、摩托车配件、通讯设备、家用电器、机械设备、工具量具、电动工具、刀 具、五金交电、电线电缆、音响设备、计算机、软件及辅助设备、体育用品、办公用品、文具用品、安防设备、电子元器件的批发、零售。的公司。上海登宁作为从事生物科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,橡塑制品、实验室设备、仪器仪表、机电设备、汽车配件、摩托车配件、通讯设备、家用电器、机械设备、工具量具、电动工具、刀 具、五金交电、电线电缆、音响设备、计算机、软件及辅助设备、体育用品、办公用品、文具用品、安防设备、电子元器件的批发、零售。的企业之一,为客户提供良好的实验耗材,医疗诊断耗材,科研耗材。上海登宁始终以本分踏实的精神和必胜的信念,影响并带动团队取得成功。上海登宁始终关注自身,在风云变化的时代,对自身的建设毫不懈怠,高度的专注与执着使上海登宁在行业的从容而自信。