用膜来对样品进行处理好处很多,操作简便,效果稳定可靠,成本效益高。实践中选择膜材质及相关装置时,主要要考虑处理样品的性质、处理量及要求的处理效果等;选择较合适的装置时,还要考虑样品的体积和装置的动力设计,比如真空或加压配套设备等。
深层过滤介质(左)内部结构松散、排列无序,通常用于去除大颗粒物的预过滤。微滤膜(中)由规则、连续的网状多聚物构成,具有精确的孔径,用来截留细菌、胶体及微小颗粒。
超滤膜(右)通常有两个明显的分层:致密的表层,厚 0.1-1.5μm,孔径 10-400Å;下层是多孔支撑物。超滤膜依赖生产工艺严格控制膜孔径规格,用于生物大分子样品处理,应用多样。
超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的,适合各种蛋白研究,但在核酸和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏过,相对于球形蛋白需要更致密的膜(截留分子量更小)。所以选择滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH或离子强度改变的情况下倾向于聚集或改变构象,因此其有效大小可能比 “天然” 分子大很多,从而导致排阻增加。比如,有些蛋白质在某些缓冲液条件下会发生多聚化,而另一些则发生解聚(如血红素蛋白)成亚基。这使选择合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验,我们通常推荐选择为目的分子大小一半的膜作为尝试的起点,再根据实际情况加以调整。陕西纯水机耗材Millipore密理博使用Millipore密理博全国代理。
样品的化学背景有时很多样而复杂,过滤的过程中很重要的一点是操作过程不应给样品带来新的污染。所以滤膜和装置与样品接触的其它部分都不能与样品中的化学成分发生反应而产生溶出污染。关于默克密理博各种微滤、超滤产品的化学相容性请参考产品使用说明书
浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞,产生除了膜本身截留分子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时,会形成相当于第二层滤膜作用的胶体层,干扰分子通过滤膜,同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。
• 在过滤过程中,可进行自动、连续 溶剂和转移过滤。无需倾倒 • 2 L 的接收瓶包括瓶塞和储存用的导 管,避免过滤后溶液的转移,从而 降低了工作量和污染风险 • 圆锥形底 2 L 接收瓶可以储存全部 过滤的溶剂 / 缓冲液 MilliSolve 过滤系统专为在真空过滤液 相色谱(LC)缓冲液和溶剂设计的。 该系统使用 0.45 µm 表面滤膜来去除 可能会缩短色谱柱使用寿命的颗粒。 使用 MillSolve 系统进行真空过滤还会从缓冲液中去除大部分的溶解气体, 从而降低气泡影响 LC 设备的风险。 使用自动和连续过滤,在过滤过程中 无需向漏斗中添加液体。过滤在封闭 式系统中进行—这在过滤危险液体时 很重要。 如果要求开放式漏斗过滤,则可以使 用 300 mL 漏斗替换真空盖Millipore超滤管如何选择?上海登宁告诉你。
Amicon® Pro 纯化超滤系统目前的蛋白纯化常常包括很多步骤,用到多种器具,却又因此带来蛋白降解和损失的问题。为了避免因样品转移带来的各种风险,减少您在样品孵育、漂洗、洗脱、浓缩及换液各步上耗费的时间,默克密理博的研发团队创新地推出了Amicon®Pro一体化纯化超滤系统。Amicon®Pro提供了对小量蛋白样品的标准化操作,使纯化浓缩蛋白变得简便高效,数据稳定易得。高产:没有样品转移,损失更少温和:特别的渗滤设计使换液过程更温和快速:从细胞裂解到纯化、优化一共需要5次低速离心灵活:一种离心方法,多方面支持各种样品制备所需上海登宁Millipore针头滤器。天津超滤离心管Millipore密理博材质
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微滤中膜的孔径大小通常以微米计,表示大于这一规格的颗粒将被膜截留。超滤膜根据 NMWL 分级,有时也用截留分子量(MWCO)。NMWL 表示大多数大于这个值的分子将在超滤时截留。一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少 90% 以上的这个大小的球形分子。但为了保险起见,实践中选择的膜孔径要小于目的分子。缓冲液置换时膜截留分子量应该充分大于流过的溶质。当膜材料相同时,孔径减小会增加排阻而减小滤过率。截留及产物回收的影响因素包括分子的形状、带电性质、样品浓度及组成成分、操作条件、使用的设备构造等。因此常常发生同样 NMWL 的膜对一定范围内的不同分子截留效果有一定差异的情况。使用超滤方法进行样品浓缩或除盐时,需要谨慎地选择合适的 NMWL 膜和设备。虽然影响因素较多,我们通常建议截留分子量约为目的分子分子量一半的膜,这样可以较大化样品的回收,同时节省过滤时间。湖南聚碳酸酯滤膜Millipore密理博欢迎选购
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