通过超滤操作精确地将混在大分子中的小分子去除的想法常常不切实际。事实上,膜的规格描述是基于截留而非通过的性质。一项实验结果 显 示,采 用 100k NMWL 滤 膜,大 于 100kDa 的分子截留率>90%,但 这 时 比 膜 孔 径 小 的 分 子 并 不 是 完 全 自 由 地 通 过 滤 膜,75kDa 的分子截留率为 83%,30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的溶液中的各种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实践中,如果要分离两种大分子,它们之间的分子量差异应该达到 10倍以上,或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间,则可达到比较理想的分离。如果蛋白溶液较为稀释,低压下操作也有助于达到更好的效果密理博再生纤维素复合膜。上海混合纤维素滤膜Millipore密理博诚信经营
超滤(UF)常用于分离溶液中极其微小的颗粒和不溶分子。虽然分离效果受到包括化学性质、电荷等多种因素影响,这种方法主要还是以分子大小为较基本的考虑。超滤膜截留1-1000kDa(MW)的分子,盐和水等小分子会透过,因此在大分子样品处理中得到了广阔应用。胶状或微粒状物质也能够被截留。UF膜既可以用于透过样品也用于保留样品的纯化。样品明显小于膜孔径,则经过膜处理可以达到除热源、澄清和与大分子污染物的分离的效果。如果目的分子远远大于膜孔径,膜处理则可以将小分子污染物去除而目的分子被浓缩。超滤方法相比沉淀法对于样品更温和,没有发生容易导致生物大分子失活的相变,而且在浓缩的同时可以完成对溶质的除盐。超滤的应用不限于蛋白样品的操作,也常用于核酸样品制备,包括分子克隆和质粒纯化。DNA和RNA样品起始浓度低至5ng/mL也可以被高效地在数分钟内被浓缩,回收率达到99%以上。离心方式的超滤方法进行溶液置换也被称为“渗滤”,操作时样品首先被浓缩,继而加入新的溶液,再次浓缩时,原溶液已经被换成选定的溶液。四川过滤系统Millipore密理博种类Millipore再生纤维素圆片超滤膜。
较大化样品回收率
浓缩液中的样本回收量低可能由于吸附损失、过度浓缩、或者样本穿过滤膜造成。
吸附损失取决于溶质浓度、其疏水性、温度、与过滤装置表面的接触时间、样本成分及pH值。 为较大限度地降低损失,离心后请立即取走浓缩后样本。
如果样本起始浓度高,请监视离心过程,以免使样本过度浓缩。 过度浓缩可导致沉淀和样本损失。
如果样本看起来渗过了滤膜,请选用较低MWCO的Amicon® Ultra-15装置。
以***膜为重点技术,默克密理博为蛋白、核酸、病毒、囊泡等生物样品和微珠(纳米颗粒)的浓缩、脱盐、换液提供多样化操作工具。您可以方便地从以下产品中,根据起始样品体积和特别的要求,选择较适合处理方案。
完整解决方案 化学相容性和溶出性 研究人员使用微滤膜去除各种水溶液和 有机溶剂中溶解的气体和颗粒。为了满 足其需要,默克密理博提供了具有广阔 化学相容性的膜。例如,Fluoro-pore ™疏 水性聚四氟乙烯膜可适用于过滤几乎所 有的有机溶剂,包括预湿后的强酸和碱 溶液。与其相比,Durapore® 聚偏氟乙烯 膜可更好地过滤水溶液,具有极低的蛋 白质吸附能力。 默克密理博的膜和过滤器由溶出度低的 聚合物制造,以确保您的过滤器在下游 能良好使用。 吸附作用 默克密理博的 Durapore(PVDF)和 Express (PES)膜经过表面改良,尽量减少吸附, 同时较大限度提高亲水性。用于溶出度 实验、食品和饮料的质量监控、土壤和 水质采样、过滤含有蛋白质添加剂的细 胞培养基。上海登宁Millipore滤膜。
除盐或渗滤
除盐、更换缓冲液或渗滤是去除含有生物分子的溶液中的盐分或溶剂的重要方法。 可以在Amicon® Ultra-15装置中,通过浓缩样本、然后向浓缩液加入任何所需溶剂复原至样本原始体积的方式,去除盐分或更换缓冲液。 可重复“洗出”过程,直到污染微溶质的浓度充分降低为止
流速
影响流速的因素包括样本的浓度、起始体积、溶质的化学性质、相对离心力、离心转子的角度、滤膜类型以及温度。图1和表1可用来估计达到给定的滤出液体积或浓度所需的时间。 15 mL样本旋转时间一般约需15至40分钟。 尽管大部分样本在离心过程的前15至30分钟滤过,但一般在旋转15至40分钟之后才能达到较低浓缩液体积(100–150 μL)。
Pellicon® 3 Biomax® 盒式超滤膜包。吉林超滤杯Millipore密理博使用
Millipore无菌针头式过滤器。上海混合纤维素滤膜Millipore密理博诚信经营
样品的化学背景有时很多样而复杂,过滤的过程中很重要的一点是操作过程不应给样品带来新的污染。所以滤膜和装置与样品接触的其它部分都不能与样品中的化学成分发生反应而产生溶出污染。关于默克密理博各种微滤、超滤产品的化学相容性请参考产品使用说明书
浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞,产生除了膜本身截留分子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时,会形成相当于第二层滤膜作用的胶体层,干扰分子通过滤膜,同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。 上海混合纤维素滤膜Millipore密理博诚信经营
上海登宁科技有限公司总部位于上海外高桥保税区美桂北路378号,是一家从事生物科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,橡塑制品、实验室设备、仪器仪表、机电设备、汽车配件、摩托车配件、通讯设备、家用电器、机械设备、工具量具、电动工具、刀 具、五金交电、电线电缆、音响设备、计算机、软件及辅助设备、体育用品、办公用品、文具用品、安防设备、电子元器件的批发、零售。的公司。公司自创立以来,投身于实验耗材,医疗诊断耗材,科研耗材,是仪器仪表的主力军。上海登宁继续坚定不移地走高质量发展道路,既要实现基本面稳定增长,又要聚焦关键领域,实现转型再突破。上海登宁始终关注自身,在风云变化的时代,对自身的建设毫不懈怠,高度的专注与执着使上海登宁在行业的从容而自信。