Q:浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
A: 首先，Amicon® Ultra超滤管的蛋白较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次，如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1）a
如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
） 是否选择了合适截留分子量的超滤管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？
b）使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
c）离心机较近是否有校准过？
d）是否尝试这个蛋白？如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的
蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用更小截留分子量的超
滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。
2）a
如果目的样本也不在滤过液中，那么：
）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？ b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。
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温度：通常增加操作时的温度可以提高超滤效率。每增加 1℃蛋白扩散率增加 3-3.5%，同时溶液粘度降低。实践中一般是以样品和设备能耐受的较高温度来操作。pH：改换溶液和 / 或 pH 常常改变分子结构，蛋白尤其如此。在蛋白的pI 值蛋白会沉淀，产生堵塞和得率损失。污垢：溶液中除了目的分子造成的浓差极化，还有其它小颗粒和分子会在膜上富集和沉淀，逐渐堆积在膜孔上或膜孔结构中，形成结晶和沉淀。
Amicon® Pro能做到一步离心完成脱盐换液蛋白缓冲液置换、脱盐和透析样品的特点和制备要求 Amicon® Pro 系统 Amicon® Ultra 超滤管 D-Tube™ 透析管快速操作 ~20 分钟 <1 小时 5 小时敏感样品，在高浓度时容易出现沉淀 适合使用 不适合使用 适合使用透析后浓缩 适合使用 适合使用 不适合使用置换的缓冲液量比较有限 适合使用 适合使用 不适合使用
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样品的化学背景有时很多样而复杂，过滤的过程中很重要的一点是操作过程不应给样品带来新的污染。所以滤膜和装置与样品接触的其它部分都不能与样品中的化学成分发生反应而产生溶出污染。关于默克密理博各种微滤、超滤产品的化学相容性请参考产品使用说明书
浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞，产生除了膜本身截留分子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时，会形成相当于第二层滤膜作用的胶体层，干扰分子通过滤膜，同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。
Amicon® Pro 纯化超滤系统目前的蛋白纯化常常包括很多步骤，用到多种器具，却又因此带来蛋白降解和损失的问题。为了避免因样品转移带来的各种风险，减少您在样品孵育、漂洗、洗脱、浓缩及换液各步上耗费的时间，默克密理博的研发团队创新地推出了Amicon®Pro一体化纯化超滤系统。Amicon®Pro提供了对小量蛋白样品的标准化操作，使纯化浓缩蛋白变得简便高效，数据稳定易得。高产：没有样品转移，损失更少温和：特别的渗滤设计使换液过程更温和快速：从细胞裂解到纯化、优化一共需要5次低速离心灵活：一种离心方法，多方面支持各种样品制备所需过滤膜的批发价格更优惠。
应用真空过滤水溶液、有机溶液或腐蚀液 体，进行颗粒污染分析。同时建议 对 HPLC 溶 剂 进 行 过 滤。 请 与 Merck Millipore 联系了解过滤有机溶液时可 使用的滤膜。 与液体接触的硼硅酸盐玻璃部件，其表面用磨砂玻璃密封。整合的底座和 盖与真空的连接处在滤液出口的上 方，可避免滤液吸入真空管。 禁止该换膜过滤器与可燃液体一起使 用。
应用： 浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸（单株或双株DNA/RNA样本）、微生物、洗出液和净化样本的生物样本， 净化组织培养基提取液和细胞溶解液中的大分子成分，从反应混合液中去除引物、连接或分子标记，在HPLC之前去除蛋白质，除盐、更换缓冲液或渗滤
所提供的材料：Amicon® Ultra-15 10K装置包括一个盖子、一个过滤器和一个离心管。
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微孔滤膜的额定孔径通常以微米值给出， 大于此值的颗粒将被截留。微滤膜孔隙 范围从 0.025 µm（用于核酸和蛋白质的微 透析技术）到0.1-0.22 µm（用于除菌过滤）， 到 0.3-0.45 µm（用于净化或微生物截留）， 到 0.45-8.0 µm（用于空气或流体颗粒监 控）。孔径为 0.22 µm 的过滤器较常用于 除菌过滤，且足以去除细菌。但 如果溶液含动物血清，则需要使用孔径 为 0.1 µm 的过滤器来去除支原体。
膜直径 特殊应用所需的过滤器直径取决于过滤 溶液的体积和流速（流量）。 膜通量和过滤能力 过滤溶液的速度和效率取决于膜的过滤 能力（或通量）。当过滤大量或严重污 染的溶液如粗制细胞裂解物时，膜孔可 达到较大过滤能力，默克密理博 Express® （PES）膜过滤器具有较高过滤能力。其不对称的孔径设计使大颗粒保留在顶 部，不堵塞截留细菌的小孔，从而提高 过滤能力并延长过滤器的使用寿命。 湖北超滤膜Millipore密理博价格
上海登宁科技有限公司总部位于上海外高桥保税区美桂北路378号，是一家从事生物科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让，橡塑制品、实验室设备、仪器仪表、机电设备、汽车配件、摩托车配件、通讯设备、家用电器、机械设备、工具量具、电动工具、刀 具、五金交电、电线电缆、音响设备、计算机、软件及辅助设备、体育用品、办公用品、文具用品、安防设备、电子元器件的批发、零售。的公司。上海登宁作为从事生物科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让，橡塑制品、实验室设备、仪器仪表、机电设备、汽车配件、摩托车配件、通讯设备、家用电器、机械设备、工具量具、电动工具、刀 具、五金交电、电线电缆、音响设备、计算机、软件及辅助设备、体育用品、办公用品、文具用品、安防设备、电子元器件的批发、零售。的企业之一，为客户提供良好的实验耗材，医疗诊断耗材，科研耗材。上海登宁始终以本分踏实的精神和必胜的信念，影响并带动团队取得成功。上海登宁始终关注自身，在风云变化的时代，对自身的建设毫不懈怠，高度的专注与执着使上海登宁在行业的从容而自信。
