Amicon® Pro 纯化超滤系统目前的蛋白纯化常常包括很多步骤,用到多种器具,却又因此带来蛋白降解和损失的问题。为了避免因样品转移带来的各种风险,减少您在样品孵育、漂洗、洗脱、浓缩及换液各步上耗费的时间,默克密理博的研发团队创新地推出了Amicon®Pro一体化纯化超滤系统。Amicon®Pro提供了对小量蛋白样品的标准化操作,使纯化浓缩蛋白变得简便高效,数据稳定易得。高产:没有样品转移,损失更少温和:特别的渗滤设计使换液过程更温和快速:从细胞裂解到纯化、优化一共需要5次低速离心灵活:一种离心方法,多方面支持各种样品制备所需Millipore密理博搅拌式超滤杯。湖南Millipore密理博材质
微滤中膜的孔径大小通常以微米计,表示大于这一规格的颗粒将被膜截留。超滤膜根据 NMWL 分级,有时也用截留分子量(MWCO)。NMWL 表示大多数大于这个值的分子将在超滤时截留。一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少 90% 以上的这个大小的球形分子。但为了保险起见,实践中选择的膜孔径要小于目的分子。缓冲液置换时膜截留分子量应该充分大于流过的溶质。当膜材料相同时,孔径减小会增加排阻而减小滤过率。截留及产物回收的影响因素包括分子的形状、带电性质、样品浓度及组成成分、操作条件、使用的设备构造等。因此常常发生同样 NMWL 的膜对一定范围内的不同分子截留效果有一定差异的情况。使用超滤方法进行样品浓缩或除盐时,需要谨慎地选择合适的 NMWL 膜和设备。虽然影响因素较多,我们通常建议截留分子量约为目的分子分子量一半的膜,这样可以较大化样品的回收,同时节省过滤时间。山东亲水性滤膜Millipore密理博欢迎选购装有超滤膜的 Amicon Ultra-4 离心超滤管。
Q:浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白,可能的原因有哪些?
A: 首先,Amicon® Ultra超滤管的蛋白较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次,如果问题仍然出现,请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因:
1)a
如果目的样本在滤过液中,那么请排查:
) 是否选择了合适截留分子量的超滤管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)?
b)使用的离心力是否是在限定范围内?如果使用的是rpm,请换算成相应的g离心力,具体换算方法请垂询。
c)离心机较近是否有校准过?
d)是否尝试这个蛋白?如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话,那么有可能是这个目的
蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响浓缩效果,建议选用更小截留分子量的超
滤管(如原本选用30k,此时可以选择10k)。
2)a
如果目的样本也不在滤过液中,那么:
)蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL? b)用来确定样本浓度的方法是什么?是否可信?
c)目的蛋白是不是沉淀了?如果是,具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。
带有摆桶式或定角式转子的离心器以及可以容纳50 mL试管的样本腔/试管座
注意: 为了避免在离心过程中损坏装置,在旋转前请检查间隙。 带有200微升(µL)的移液管,用于浓缩液回收
适用性
为确保对预定用途的适用性,建议进行初步的回收和截留试验。 请参见“如何量化回收”部分。
保质期:保质期自生产之日起三年。请参考包装标签上的到期日。
使用前的冲洗:Amicon® Ultra-15 10K装置的超过滤薄膜含有微量甘油。如果此材料干扰分析,可在使用之前用缓冲液或Milli-Q®水冲洗。如果干扰仍然存在,用0.1 N NaOH清洗,然后用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。
注意: Amicon®超过滤装置中的滤膜一旦润湿后应避免重新干燥。若在冲洗后没有立即使用该装置,则让液体保留在滤膜上,直到使用该装置为止。
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非无菌 Millex 过滤器现在采用一种更大的新 外壳,达 33 mm,装有默克密理博 Express PLUS (PES),Durapore (PVDF)和尼龙膜。 流速更快 更大的滤膜表面积提高了流速。它还降低了 排空注射器所需要的压力,从而使过滤溶液 更容易。 低保留体积 尽管膜表面积升高了,但是保留体积 ( 空气 吹过后 ) 被降低到 80 µL,比 25 mm Millex 过 滤器下降了 20%。 更高的操作压力 新型 33 mm Millex 非无菌包装过滤器较大外 壳压力为 8.6 bar(125 psi),这意味着你可 以比以前更快速的过滤溶液。 Millipore再生纤维素膜。江苏混合纤维素滤膜Millipore密理博使用
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默克密理博 Amicon® Ultra 离心式超滤管因其完美的设计一经推出即成为生物样品操作的行业参照对象产品。不论是蛋白、核酸、病毒或颗粒物,抑或低浓度样品或宝贵的活性样品,Amicon® Ultra 都能兼顾高回收率和操作的方便性及标准化,并满足下游各种应用的要求,使研究者处理样品时倍感轻松。Amicon® Ultra 超滤管的独特优点:有效浓缩同时保证较高的蛋白回收率合理的死体积设计
避免样品离干而降低回收率
•便于估计和控制样品浓缩倍数
•重复性好,便于样品数据相互比较
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上海登宁科技有限公司是一家从事生物科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,橡塑制品、实验室设备、仪器仪表、机电设备、汽车配件、摩托车配件、通讯设备、家用电器、机械设备、工具量具、电动工具、刀 具、五金交电、电线电缆、音响设备、计算机、软件及辅助设备、体育用品、办公用品、文具用品、安防设备、电子元器件的批发、零售。的公司,是一家集研发、设计、生产和销售为一体的专业化公司。上海登宁深耕行业多年,始终以客户的需求为向导,为客户提供***的实验耗材,医疗诊断耗材,科研耗材。上海登宁继续坚定不移地走高质量发展道路,既要实现基本面稳定增长,又要聚焦关键领域,实现转型再突破。上海登宁始终关注自身,在风云变化的时代,对自身的建设毫不懈怠,高度的专注与执着使上海登宁在行业的从容而自信。