Q:浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白,可能的原因有哪些?
A: 首先,Amicon® Ultra超滤管的蛋白较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次,如果问题仍然出现,请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因:
1)a
如果目的样本在滤过液中,那么请排查:
) 是否选择了合适截留分子量的超滤管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)?
b)使用的离心力是否是在限定范围内?如果使用的是rpm,请换算成相应的g离心力,具体换算方法请垂询。
c)离心机较近是否有校准过?
d)是否尝试这个蛋白?如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话,那么有可能是这个目的
蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响浓缩效果,建议选用更小截留分子量的超
滤管(如原本选用30k,此时可以选择10k)。
2)a
如果目的样本也不在滤过液中,那么:
)蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL? b)用来确定样本浓度的方法是什么?是否可信?
c)目的蛋白是不是沉淀了?如果是,具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。
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Centriprep®超滤管是一次性使用的离心管,可以用于2-15mL生物样品的纯化、浓缩、脱盐等过滤应用。这种离心超滤管流速很快,设计紧凑,螺旋盖使用起来非常方便,过滤收集管内置低吸附的Ultracel®再生纤维素膜,装有气密盖。优点与应用特有的反向流操作模式,较大的死体积,采用Ultracel®膜,用于浓缩和纯化富含颗粒物,的高浓度样品,样品回收率>90%,配合标准的50mL离心管吊篮式转子使用,从发酵培养基、细胞培养基、细胞裂解液中分,离低分子量溶质河南离心管Millipore密理博一级代理Millipore密理博8300型超滤杯。
蛋白质截留率和浓缩液回收率
Amicon®超过滤装置滤膜的特征由截留分子量(MWCO)描述,即它们截留超过一定分子量的分子的能力。分子量接近MWCO的溶质可能只有部分被截留。滤膜的截留率取决于溶质的分子大小和形状。在大多数应用中,分子量是用来评估截留特性的一个方便的参数。为了获得较佳结果,请使用MWCO至少比要浓缩的蛋白质溶质分子量小两倍的滤膜
如何量化回收
使用以下方法计算总回收量、浓缩液回收率%及滤出液回收率%。 本程序可算出浓度较高约20 mg/mL的溶液的回收量近似值。
说明: 适当的化验技术包括吸收分光光度学法、放射免疫检定法、折光率及传导性。
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非无菌 Millex 过滤器现在采用一种更大的新 外壳,达 33 mm,装有默克密理博 Express PLUS (PES),Durapore (PVDF)和尼龙膜。 流速更快 更大的滤膜表面积提高了流速。它还降低了 排空注射器所需要的压力,从而使过滤溶液 更容易。 低保留体积 尽管膜表面积升高了,但是保留体积 ( 空气 吹过后 ) 被降低到 80 µL,比 25 mm Millex 过 滤器下降了 20%。 更高的操作压力 新型 33 mm Millex 非无菌包装过滤器较大外 壳压力为 8.6 bar(125 psi),这意味着你可 以比以前更快速的过滤溶液。 Pellicon® 3 Biomax® 盒式超滤膜包。广东超滤膜Millipore密理博用途
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超滤过程中需要在速率和回收率之间平衡以期获得较好的效果。滤膜的通量的定义是流量除以面积,使用高 NMWL 滤膜可以增加通量,但同时会降低回收率。选择膜和装置时需要同时考虑截留分子量和通量。而参与影响通量的因素很多,包括:压力:较为稀释的蛋白溶液或胶体悬液进行超滤时,流量随着跨膜压力(TMP)的增大而增加。正压条件下操作,如 Stirred Cell 搅拌式超滤杯,这种因素影响较为明显。如果极化影响明显,通量会达到一个平台,甚至可能随着压力的增加而降低。浓度:当需要截留的样品浓度很低时,通量通常不受浓度影响。操作过程中,随着溶质浓度的升高,增加的粘滞性和极化将导致通量降低。 安徽聚碳酸酯滤膜Millipore密理博销售
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