样品的化学背景有时很多样而复杂,过滤的过程中很重要的一点是操作过程不应给样品带来新的污染。所以滤膜和装置与样品接触的其它部分都不能与样品中的化学成分发生反应而产生溶出污染。关于默克密理博各种微滤、超滤产品的化学相容性请参考产品使用说明书
浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞,产生除了膜本身截留分子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时,会形成相当于第二层滤膜作用的胶体层,干扰分子通过滤膜,同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。 Millipore密理博过滤器价格。辽宁离心管Millipore密理博
Amicon® Ultra-15 10K离心过滤器具有快速超过滤功能,能够达到较高的浓缩系数,易于从稀释液和复杂的样本组合进行浓缩液回收。 其竖式设计以及可用的滤膜表面积能提供快速的样本处理和较高的样本回收率(通常大于90%稀薄的初始溶液),并能进行80倍浓缩。典型的处理时间为15至40分钟。 竖式设计将溶质极化和之后造成的滤膜结垢降至较低,过滤装置中的物理止滤点防止过滤器旋转过度使样本干燥和造成样本损失。 浓缩液用移液管从过滤器的样本槽中收集,而超过滤滤出液则收集到所提供的离心管中。 该装置可在摆桶或定角转子中旋转。 Amicon® Ultra-15 10K装置未经消毒,只供一次使用。陕西聚碳酸酯滤膜Millipore密理博材质上海登宁过滤膜安心售后。
微滤中膜的孔径大小通常以微米计,表示大于这一规格的颗粒将被膜截留。超滤膜根据 NMWL 分级,有时也用截留分子量(MWCO)。NMWL 表示大多数大于这个值的分子将在超滤时截留。一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少 90% 以上的这个大小的球形分子。但为了保险起见,实践中选择的膜孔径要小于目的分子。缓冲液置换时膜截留分子量应该充分大于流过的溶质。当膜材料相同时,孔径减小会增加排阻而减小滤过率。截留及产物回收的影响因素包括分子的形状、带电性质、样品浓度及组成成分、操作条件、使用的设备构造等。因此常常发生同样 NMWL 的膜对一定范围内的不同分子截留效果有一定差异的情况。使用超滤方法进行样品浓缩或除盐时,需要谨慎地选择合适的 NMWL 膜和设备。虽然影响因素较多,我们通常建议截留分子量约为目的分子分子量一半的膜,这样可以较大化样品的回收,同时节省过滤时间。
超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的,适合各种蛋白研究,但在核酸和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏过,相对于球形蛋白需要更致密的膜(截留分子量更小)。所以选择滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH或离子强度改变的情况下倾向于聚集或改变构象,因此其有效大小可能比 “天然” 分子大很多,从而导致排阻增加。比如,有些蛋白质在某些缓冲液条件下会发生多聚化,而另一些则发生解聚(如血红素蛋白)成亚基。这使选择合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验,我们通常推荐选择为目的分子大小一半的膜作为尝试的起点,再根据实际情况加以调整。Millipore纯化超滤管。
温度敏感 温度对速度影响很小 温度对速度影响很小 温度较低时速度明显降低每一种蛋白的制备都是独特的,常常需要摸索和优化。应该考虑为特定蛋白选择相应的工具进行换液和透析。您可以从操作较快 Amicon® Pro 的渗滤法或更温和的 D-Tube™透析法中选择更适合样品的操作方法。这是一种只用一步温和的离心完成渗滤而较大程度保持蛋白活性的好方法。为了与下游应用兼容,常常需要用透析或渗滤方法对蛋白样品进行缓冲液置换。传统透析方法需要时间很长,多步透析容易造成样品丢失、损耗和失活,而且较后还需要一步浓缩。新产品 Amicon® Pro 带来了突破性的革新,只需一步温和的渗滤操作即可达到同时对样品进行换液和浓缩的目的。
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通过超滤操作精确地将混在大分子中的小分子去除的想法常常不切实际。事实上,膜的规格描述是基于截留而非通过的性质。一项实验结果 显 示,采 用 100k NMWL 滤 膜,大 于 100kDa 的分子截留率>90%,但 这 时 比 膜 孔 径 小 的 分 子 并 不 是 完 全 自 由 地 通 过 滤 膜,75kDa 的分子截留率为 83%,30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的溶液中的各种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实践中,如果要分离两种大分子,它们之间的分子量差异应该达到 10倍以上,或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间,则可达到比较理想的分离。如果蛋白溶液较为稀释,低压下操作也有助于达到更好的效果辽宁离心管Millipore密理博
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