Amicon® Pro 纯化超滤系统目前的蛋白纯化常常包括很多步骤,用到多种器具,却又因此带来蛋白降解和损失的问题。为了避免因样品转移带来的各种风险,减少您在样品孵育、漂洗、洗脱、浓缩及换液各步上耗费的时间,默克密理博的研发团队创新地推出了Amicon®Pro一体化纯化超滤系统。Amicon®Pro提供了对小量蛋白样品的标准化操作,使纯化浓缩蛋白变得简便高效,数据稳定易得。高产:没有样品转移,损失更少温和:特别的渗滤设计使换液过程更温和快速:从细胞裂解到纯化、优化一共需要5次低速离心灵活:一种离心方法,多方面支持各种样品制备所需上海登宁Millipore滤膜。安徽离心管Millipore密理博代理
蛋白质截留率和浓缩液回收率
Amicon®超过滤装置滤膜的特征由截留分子量(MWCO)描述,即它们截留超过一定分子量的分子的能力。分子量接近MWCO的溶质可能只有部分被截留。滤膜的截留率取决于溶质的分子大小和形状。在大多数应用中,分子量是用来评估截留特性的一个方便的参数。为了获得较佳结果,请使用MWCO至少比要浓缩的蛋白质溶质分子量小两倍的滤膜
如何量化回收
使用以下方法计算总回收量、浓缩液回收率%及滤出液回收率%。 本程序可算出浓度较高约20 mg/mL的溶液的回收量近似值。
说明: 适当的化验技术包括吸收分光光度学法、放射免疫检定法、折光率及传导性。
安徽离心管Millipore密理博代理Millipore Pellicon2小型超滤膜包。
通过超滤操作精确地将混在大分子中的小分子去除的想法常常不切实际。事实上,膜的规格描述是基于截留而非通过的性质。一项实验结果 显 示,采 用 100k NMWL 滤 膜,大 于 100kDa 的分子截留率>90%,但 这 时 比 膜 孔 径 小 的 分 子 并 不 是 完 全 自 由 地 通 过 滤 膜,75kDa 的分子截留率为 83%,30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的溶液中的各种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实践中,如果要分离两种大分子,它们之间的分子量差异应该达到 10倍以上,或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间,则可达到比较理想的分离。如果蛋白溶液较为稀释,低压下操作也有助于达到更好的效果
微孔滤膜的额定孔径通常以微米值给出, 大于此值的颗粒将被截留。微滤膜孔隙 范围从 0.025 µm(用于核酸和蛋白质的微 透析技术)到0.1-0.22 µm(用于除菌过滤), 到 0.3-0.45 µm(用于净化或微生物截留), 到 0.45-8.0 µm(用于空气或流体颗粒监 控)。孔径为 0.22 µm 的过滤器较常用于 除菌过滤,且足以去除细菌。但 如果溶液含动物血清,则需要使用孔径 为 0.1 µm 的过滤器来去除支原体。
膜直径 特殊应用所需的过滤器直径取决于过滤 溶液的体积和流速(流量)。 膜通量和过滤能力 过滤溶液的速度和效率取决于膜的过滤 能力(或通量)。当过滤大量或严重污 染的溶液如粗制细胞裂解物时,膜孔可 达到较大过滤能力,默克密理博 Express® (PES)膜过滤器具有较高过滤能力。其不对称的孔径设计使大颗粒保留在顶 部,不堵塞截留细菌的小孔,从而提高 过滤能力并延长过滤器的使用寿命。 上海登宁Millipore过滤膜的特点。
样品的化学背景有时很多样而复杂,过滤的过程中很重要的一点是操作过程不应给样品带来新的污染。所以滤膜和装置与样品接触的其它部分都不能与样品中的化学成分发生反应而产生溶出污染。关于默克密理博各种微滤、超滤产品的化学相容性请参考产品使用说明书
浓差极化实质是溶质累积在膜表面造成的堵塞,产生除了膜本身截留分子量以外的过滤限制。当溶质浓度较高时,会形成相当于第二层滤膜作用的胶体层,干扰分子通过滤膜,同时降低流速。pH 值、缓冲液的成分也会影响目的分子的状态而使浓差极化现象加剧或减轻。 Millipore密理博切向流过滤装置。超滤杯Millipore密理博代理
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用膜来对样品进行处理好处很多,操作简便,效果稳定可靠,成本效益高。实践中选择膜材质及相关装置时,主要要考虑处理样品的性质、处理量及要求的处理效果等;选择较合适的装置时,还要考虑样品的体积和装置的动力设计,比如真空或加压配套设备等。
深层过滤介质(左)内部结构松散、排列无序,通常用于去除大颗粒物的预过滤。微滤膜(中)由规则、连续的网状多聚物构成,具有精确的孔径,用来截留细菌、胶体及微小颗粒。
超滤膜(右)通常有两个明显的分层:致密的表层,厚 0.1-1.5μm,孔径 10-400Å;下层是多孔支撑物。超滤膜依赖生产工艺严格控制膜孔径规格,用于生物大分子样品处理,应用多样。
上海登宁科技有限公司是一家从事生物科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让,橡塑制品、实验室设备、仪器仪表、机电设备、汽车配件、摩托车配件、通讯设备、家用电器、机械设备、工具量具、电动工具、刀 具、五金交电、电线电缆、音响设备、计算机、软件及辅助设备、体育用品、办公用品、文具用品、安防设备、电子元器件的批发、零售。的公司,致力于发展为创新务实、诚实可信的企业。上海登宁拥有一支经验丰富、技术创新的专业研发团队,以高度的专注和执着为客户提供实验耗材,医疗诊断耗材,科研耗材。上海登宁致力于把技术上的创新展现成对用户产品上的贴心,为用户带来良好体验。上海登宁始终关注仪器仪表市场,以敏锐的市场洞察力,实现与客户的成长共赢。