外泌小体(Exosome)是一种囊泡结构,直径通常在30-150nm,常见于正常体液和病理样本,培养细胞也可分泌。研究人员已经在血液、唾液、尿液、母乳等中发现外泌小体,其运载的蛋白和核酸涉及其细胞间物资、信息交流,影响和调控着多方面的生理功能,包括免疫促进、凋亡调控、血管生成、炎症反应及发育和分化等。由于在体液中出现,外泌小体对于临床生物标志物检测特别有利,成为体外诊断、biomarker研究的新热点。近年来随着分离纯化技术的提高,关于外泌小体的研究成果颇丰;这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索,已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求,以及起始样品的规模、数量,可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒,对操作人员也没有特别的经验要求,超滤法后来居上,成为实验室中制备外泌体的通用方法。装有超滤膜的 Amicon Ultra-4 离心超滤管。北京纯水机耗材Millipore密理博使用
用于15-70mL生物溶液的快速浓缩等操作。70mL的样品在25分钟内浓缩至350μL;死体积设计确保样品不会被离干而损失。依起始材料不同、起始体积不同,样品可被浓缩50-200倍。低吸附竖向再生纤维素超滤膜及双超滤柱设计,加快处理速度;反转离心操作进一步使宝贵的浓缩样品回收率得以提高。这个产品替代传统的透析、冻干、沉淀或搅拌式浓缩等技术和方法,是非常方便的工具。
Microcon®为横膜式超滤管,没有死体积,用于大分子样品的浓缩、脱盐、换液都非常高效方便。实际应用中还常用于大分子与其它分子的分离,比如蛋白酶切后的处理及药物结合率分析等等。这种小管适合在1.5mL离心机中使用,其Ultracel®超滤膜对于蛋白及其它成分都表现出极低的非特异性结合,连同医药级O型圈封闭设计,确保更少的样品丢失,更稳定的数据结果。诸多考虑周到的精细设计使Microcon®成为较好用的样品制备工具之一。 浙江超滤杯Millipore密理博价格超滤离心管实验室耗材。
微孔滤膜的额定孔径通常以微米值给出, 大于此值的颗粒将被截留。微滤膜孔隙 范围从 0.025 µm(用于核酸和蛋白质的微 透析技术)到0.1-0.22 µm(用于除菌过滤), 到 0.3-0.45 µm(用于净化或微生物截留), 到 0.45-8.0 µm(用于空气或流体颗粒监 控)。孔径为 0.22 µm 的过滤器较常用于 除菌过滤,且足以去除细菌。但 如果溶液含动物血清,则需要使用孔径 为 0.1 µm 的过滤器来去除支原体。
膜直径 特殊应用所需的过滤器直径取决于过滤 溶液的体积和流速(流量)。 膜通量和过滤能力 过滤溶液的速度和效率取决于膜的过滤 能力(或通量)。当过滤大量或严重污 染的溶液如粗制细胞裂解物时,膜孔可 达到较大过滤能力,默克密理博 Express® (PES)膜过滤器具有较高过滤能力。其不对称的孔径设计使大颗粒保留在顶 部,不堵塞截留细菌的小孔,从而提高 过滤能力并延长过滤器的使用寿命。
超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的,适合各种蛋白研究,但在核酸和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏过,相对于球形蛋白需要更致密的膜(截留分子量更小)。所以选择滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH或离子强度改变的情况下倾向于聚集或改变构象,因此其有效大小可能比 “天然” 分子大很多,从而导致排阻增加。比如,有些蛋白质在某些缓冲液条件下会发生多聚化,而另一些则发生解聚(如血红素蛋白)成亚基。这使选择合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验,我们通常推荐选择为目的分子大小一半的膜作为尝试的起点,再根据实际情况加以调整。Millipore超纯水UV灯。
Amicon® Pro能做到一步离心完成脱盐换液蛋白缓冲液置换、脱盐和透析样品的特点和制备要求 Amicon® Pro 系统 Amicon® Ultra 超滤管 D-Tube™ 透析管快速操作 ~20 分钟 <1 小时 5 小时敏感样品,在高浓度时容易出现沉淀 适合使用 不适合使用 适合使用透析后浓缩 适合使用 适合使用 不适合使用置换的缓冲液量比较有限 适合使用 适合使用 不适合使用
Microcon® DNA Fast Flow 超滤管,专门设计用于从含有SDS的溶液中浓缩和回收基因组DNA。管子和膜均为低非特异性吸附的材质,医用级O型圈密封,保证了在洗涤步骤中样品丢失较少。反转回收设计,即使样品量很小也能获得理想的得率,浓缩倍数可以达到20X。 Millipore聚碳酸酯膜。江苏小型膜包Millipore密理博代理
Millipore TS2预处理柱。北京纯水机耗材Millipore密理博使用
应用真空过滤水溶液、有机溶液或腐蚀液 体,进行颗粒污染分析。同时建议 对 HPLC 溶 剂 进 行 过 滤。 请 与 Merck Millipore 联系了解过滤有机溶液时可 使用的滤膜。 与液体接触的硼硅酸盐玻璃部件,其表面用磨砂玻璃密封。整合的底座和 盖与真空的连接处在滤液出口的上 方,可避免滤液吸入真空管。 禁止该换膜过滤器与可燃液体一起使 用。
应用: 浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸(单株或双株DNA/RNA样本)、微生物、洗出液和净化样本的生物样本, 净化组织培养基提取液和细胞溶解液中的大分子成分,从反应混合液中去除引物、连接或分子标记,在HPLC之前去除蛋白质,除盐、更换缓冲液或渗滤
所提供的材料:Amicon® Ultra-15 10K装置包括一个盖子、一个过滤器和一个离心管。
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