微孔滤膜的额定孔径通常以微米值给出, 大于此值的颗粒将被截留。微滤膜孔隙 范围从 0.025 µm(用于核酸和蛋白质的微 透析技术)到0.1-0.22 µm(用于除菌过滤), 到 0.3-0.45 µm(用于净化或微生物截留), 到 0.45-8.0 µm(用于空气或流体颗粒监 控)。孔径为 0.22 µm 的过滤器较常用于 除菌过滤,且足以去除细菌。但 如果溶液含动物血清,则需要使用孔径 为 0.1 µm 的过滤器来去除支原体。
膜直径 特殊应用所需的过滤器直径取决于过滤 溶液的体积和流速(流量)。 膜通量和过滤能力 过滤溶液的速度和效率取决于膜的过滤 能力(或通量)。当过滤大量或严重污 染的溶液如粗制细胞裂解物时,膜孔可 达到较大过滤能力,默克密理博 Express® (PES)膜过滤器具有较高过滤能力。其不对称的孔径设计使大颗粒保留在顶 部,不堵塞截留细菌的小孔,从而提高 过滤能力并延长过滤器的使用寿命。 Millipore Stericup® 过滤杯。辽宁聚碳酸酯滤膜Millipore密理博品牌
如何使用Amicon® Ultra-15离心过滤器
1. 向Amicon® Ultra超过滤装置加入不超过15 mL的样本(如果使用定角转子则为12 mL)。
2. 将盖好盖子的过滤装置放入离心转子中,用一个类似的装置抵住。
3. 当使用摆桶转子时,以较大4,000 × g旋转约15–40分钟。
当使用定角转子时,装置的方向要使滤膜面板朝上,以较大5,000 × g旋转约15–40分钟。
说明: 关于典型旋转时间,请参见图1和表1。
4. 如要回收浓缩后的溶质,在过滤装置底部插入一个移液管,然后左右摇摆着吸取样本,以确保完全回收。 超滤液可以保存在离心管中。
说明: 要想达到理想回收,离心后请立即取走浓缩后样本。
辽宁聚碳酸酯滤膜Millipore密理博品牌Millipore密理博PVDF滤膜。
Amicon® Ultra-15 10K离心过滤器具有快速超过滤功能,能够达到较高的浓缩系数,易于从稀释液和复杂的样本组合进行浓缩液回收。 其竖式设计以及可用的滤膜表面积能提供快速的样本处理和较高的样本回收率(通常大于90%稀薄的初始溶液),并能进行80倍浓缩。典型的处理时间为15至40分钟。 竖式设计将溶质极化和之后造成的滤膜结垢降至较低,过滤装置中的物理止滤点防止过滤器旋转过度使样本干燥和造成样本损失。 浓缩液用移液管从过滤器的样本槽中收集,而超过滤滤出液则收集到所提供的离心管中。 该装置可在摆桶或定角转子中旋转。 Amicon® Ultra-15 10K装置未经消毒,只供一次使用。
Q:浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白,可能的原因有哪些?
A: 首先,Amicon® Ultra超滤管的蛋白较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次,如果问题仍然出现,请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因:
1)a
如果目的样本在滤过液中,那么请排查:
) 是否选择了合适截留分子量的超滤管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)?
b)使用的离心力是否是在限定范围内?如果使用的是rpm,请换算成相应的g离心力,具体换算方法请垂询。
c)离心机较近是否有校准过?
d)是否尝试这个蛋白?如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话,那么有可能是这个目的
蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响浓缩效果,建议选用更小截留分子量的超
滤管(如原本选用30k,此时可以选择10k)。
2)a
如果目的样本也不在滤过液中,那么:
)蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL? b)用来确定样本浓度的方法是什么?是否可信?
c)目的蛋白是不是沉淀了?如果是,具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。
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外泌小体(Exosome)是一种囊泡结构,直径通常在30-150nm,常见于正常体液和病理样本,培养细胞也可分泌。研究人员已经在血液、唾液、尿液、母乳等中发现外泌小体,其运载的蛋白和核酸涉及其细胞间物资、信息交流,影响和调控着多方面的生理功能,包括免疫促进、凋亡调控、血管生成、炎症反应及发育和分化等。由于在体液中出现,外泌小体对于临床生物标志物检测特别有利,成为体外诊断、biomarker研究的新热点。近年来随着分离纯化技术的提高,关于外泌小体的研究成果颇丰;这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索,已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求,以及起始样品的规模、数量,可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒,对操作人员也没有特别的经验要求,超滤法后来居上,成为实验室中制备外泌体的通用方法。Millipore无菌针头式过滤器。重庆过滤系统Millipore密理博销售
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三种材质的膜可供选择 采 用 默 克 密 理 博 Express PLUS(PES) 膜 的 Millex 过滤器具有较快的流速,双倍于 25 mm 标准针头式过滤器的通量。Durapore 膜在所 有膜中的蛋白吸附较低,推荐用于过滤含有 蛋白质的溶液。尼龙材质具有广阔的化学相 容性,可以用于水溶液和有机溶液的一般性 过滤。 低溶出性 外壳材料和膜的溶出物很低,不会干扰分析 产品。 自动生产过程 33 mm Millex 过滤器的生产过程从膜切割到包 装都是通过流水线装置完全自动进行的以使 污染的风险较小化。辽宁聚碳酸酯滤膜Millipore密理博品牌
上海登宁科技有限公司致力于仪器仪表,是一家贸易型公司。公司业务分为实验耗材,医疗诊断耗材,科研耗材等,目前不断进行创新和服务改进,为客户提供良好的产品和服务。公司秉持诚信为本的经营理念,在仪器仪表深耕多年,以技术为先导,以自主产品为重点,发挥人才优势,打造仪器仪表良好品牌。在社会各界的鼎力支持下,持续创新,不断铸造***服务体验,为客户成功提供坚实有力的支持。