外泌小体（Exosome）是一种囊泡结构，直径通常在30-150nm，常见于正常体液和病理样本，培养细胞也可分泌。研究人员已经在血液、唾液、尿液、母乳等中发现外泌小体，其运载的蛋白和核酸涉及其细胞间物资、信息交流，影响和调控着多方面的生理功能，包括免疫促进、凋亡调控、血管生成、炎症反应及发育和分化等。由于在体液中出现，外泌小体对于临床生物标志物检测特别有利，成为体外诊断、biomarker研究的新热点。近年来随着分离纯化技术的提高，关于外泌小体的研究成果颇丰；这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索，已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求，以及起始样品的规模、数量，可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒，对操作人员也没有特别的经验要求，超滤法后来居上，成为实验室中制备外泌体的通用方法。Millipore密理博过滤器价格。针头滤器Millipore密理博价格
Ultrafree®-MC（0.5mL）和Ultrafree®-CL（2mL）是一次性使用的微滤离心管，可以用于各种水性样品和在某些溶剂中的样品除菌、除颗粒物、除沉淀的处理。提供两种体积及多种膜孔径以及已经经过无菌处理的产品供选择。Ultrafree®微滤离心管操作简便、样品回收率高且重复性很好，是蛋白和核酸样品处理的理想选择。
特点与优点
有0.1-5.0μm五种膜孔径供选择
采用高回收率的亲水Durapore® (PVDF)膜和亲水PTFE膜
提供无菌包装和非无菌包装形式产品
过滤速度快，数据稳定、重现性好
上样体积为0.5mL (MC)或2mL (CL)
配合1.5mL离心管固定转子(MC)或15mL离心管转子使用
顶盖颜色标识易于区分膜孔径
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用膜来对样品进行处理好处很多，操作简便，效果稳定可靠，成本效益高。实践中选择膜材质及相关装置时，主要要考虑处理样品的性质、处理量及要求的处理效果等；选择较合适的装置时，还要考虑样品的体积和装置的动力设计，比如真空或加压配套设备等。
深层过滤介质（左）内部结构松散、排列无序，通常用于去除大颗粒物的预过滤。微滤膜（中）由规则、连续的网状多聚物构成，具有精确的孔径，用来截留细菌、胶体及微小颗粒。
超滤膜（右）通常有两个明显的分层：致密的表层，厚 0.1-1.5μm，孔径 10-400Å；下层是多孔支撑物。超滤膜依赖生产工艺严格控制膜孔径规格，用于生物大分子样品处理，应用多样。
Pellicon® 3 Ultracel® 盒式超滤膜包
Pellicon® 3 Ultracel® 盒式超滤膜包是先进的高性能超滤膜包。其独特的聚丙烯外壳，热熔合构造，以及其装有的无缺陷型 Ultracel® PLC 再生纤维素复合膜，使其能够耐受更高的操作压力、温度、有机溶剂和更苛刻的清洗条件。
Pellicon® 3 膜包将硬聚丙烯外壳和膜端帽整合，这样的结构可保护超滤膜，使超滤膜免受碰撞和其它潜在损坏的影响。同时将垫圈整合进膜包端帽，因此安装时不需要使用额外的膜包间垫片。
Pellicon® 3 膜包独特的结构设计及全自动制造工艺提供了****的表现一致性和不同型号膜包间更精细的线性放大能力。
Pellicon® 3 Ultracel® 超滤膜包是处理胰岛素，多肽，小分子制剂，单抗，生物仿制药，血液制品等的理想超滤装置。
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Q:浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
A: 首先，Amicon® Ultra超滤管的蛋白较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次，如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1）a
如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
） 是否选择了合适截留分子量的超滤管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？
b）使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
c）离心机较近是否有校准过？
d）是否尝试这个蛋白？如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的
蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用更小截留分子量的超
滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。
2）a
如果目的样本也不在滤过液中，那么：
）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？ b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。
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温度：通常增加操作时的温度可以提高超滤效率。每增加 1℃蛋白扩散率增加 3-3.5%，同时溶液粘度降低。实践中一般是以样品和设备能耐受的较高温度来操作。pH：改换溶液和 / 或 pH 常常改变分子结构，蛋白尤其如此。在蛋白的pI 值蛋白会沉淀，产生堵塞和得率损失。污垢：溶液中除了目的分子造成的浓差极化，还有其它小颗粒和分子会在膜上富集和沉淀，逐渐堆积在膜孔上或膜孔结构中，形成结晶和沉淀。
Amicon® Pro能做到一步离心完成脱盐换液蛋白缓冲液置换、脱盐和透析样品的特点和制备要求 Amicon® Pro 系统 Amicon® Ultra 超滤管 D-Tube™ 透析管快速操作 ~20 分钟 <1 小时 5 小时敏感样品，在高浓度时容易出现沉淀 适合使用 不适合使用 适合使用透析后浓缩 适合使用 适合使用 不适合使用置换的缓冲液量比较有限 适合使用 适合使用 不适合使用
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