Q:浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
A: 首先，Amicon® Ultra超滤管的蛋白较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次，如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1）a
如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
） 是否选择了合适截留分子量的超滤管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？
b）使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
c）离心机较近是否有校准过？
d）是否尝试这个蛋白？如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的
蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用更小截留分子量的超
滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。
2）a
如果目的样本也不在滤过液中，那么：
）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？ b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。
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直接称重程序
大多数稀释蛋白的密度与水的密度大致相同 (即1 g/mL)。 利用这一特性，可通过称取浓缩液与滤过液重量并将其单位从克转化成毫升的方法，对其进行量化。 本方法适用于浓度不超过或约为20 mg/mL的溶液。
1. 使用之前，分别称取空的过滤装置、离心管和空的浓缩液收集管的重量。
2. 在过滤装置中加入溶液，然后重新称重。
3. 按说明组装装置和离心机。
4. 用移液管收集浓缩液，然后将其注入到已经预先称重的浓缩液收集管。
5. 从离心管上取下装置，然后称取离心管和浓缩液收集管的重量。
6. 减去空的装置/试管的重量，计算初始材料、滤过液及浓缩液的重量。
7. 化验初始材料、滤出液及浓缩液，以确定溶质浓度。
8. 使用重量/体积数据及所测出的浓度来计算回收量
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外泌小体（Exosome）是一种囊泡结构，直径通常在30-150nm，常见于正常体液和病理样本，培养细胞也可分泌。研究人员已经在血液、唾液、尿液、母乳等中发现外泌小体，其运载的蛋白和核酸涉及其细胞间物资、信息交流，影响和调控着多方面的生理功能，包括免疫促进、凋亡调控、血管生成、炎症反应及发育和分化等。由于在体液中出现，外泌小体对于临床生物标志物检测特别有利，成为体外诊断、biomarker研究的新热点。近年来随着分离纯化技术的提高，关于外泌小体的研究成果颇丰；这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索，已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求，以及起始样品的规模、数量，可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒，对操作人员也没有特别的经验要求，超滤法后来居上，成为实验室中制备外泌体的通用方法。
lC Millex 过滤器 专为离子色谱设计的 13 mm 和 25 mm 低溶出物过滤器。 IC Millex 过滤器提供两种孔径和两种直 径。13 mm 过滤器可用于过滤从 1 到 1O mL 的溶液。25 mm 过滤器可用于过 滤 10 到 100 mL 溶液。每批过滤器都通 过测试以确保符合密理博的质量控制标 准。标准包括：泡点、流速、外壳压力、 下游颗粒和 IC 级别。每一个包装盒中 都有完整技术指标的质量证书。低吸附性、低溶出的聚四氟乙烯（PTFE）膜 可用于去除水和温和有机溶液中的微粒，使 IC 色谱更清晰。外壳由低溶出性、高密度的 聚乙烯（HDPE）制造。此外，每个过滤器单 独包装以减少外部颗粒污染的危险。上海登宁科技有限公司Millipore滤膜。
超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的，适合各种蛋白研究，但在核酸和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏过，相对于球形蛋白需要更致密的膜（截留分子量更小）。所以选择滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH或离子强度改变的情况下倾向于聚集或改变构象，因此其有效大小可能比 “天然” 分子大很多，从而导致排阻增加。比如，有些蛋白质在某些缓冲液条件下会发生多聚化，而另一些则发生解聚（如血红素蛋白）成亚基。这使选择合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验，我们通常推荐选择为目的分子大小一半的膜作为尝试的起点，再根据实际情况加以调整。Millipore密理博过滤器价格。吉林针头滤器Millipore密理博厂家
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Amicon® Ultra-15 10K离心过滤器具有快速超过滤功能，能够达到较高的浓缩系数，易于从稀释液和复杂的样本组合进行浓缩液回收。 其竖式设计以及可用的滤膜表面积能提供快速的样本处理和较高的样本回收率（通常大于90%稀薄的初始溶液），并能进行80倍浓缩。典型的处理时间为15至40分钟。 竖式设计将溶质极化和之后造成的滤膜结垢降至较低，过滤装置中的物理止滤点防止过滤器旋转过度使样本干燥和造成样本损失。 浓缩液用移液管从过滤器的样本槽中收集，而超过滤滤出液则收集到所提供的离心管中。 该装置可在摆桶或定角转子中旋转。 Amicon® Ultra-15 10K装置未经消毒，只供一次使用。山东亲水性滤膜Millipore密理博使用
上海登宁科技有限公司主要经营范围是仪器仪表，拥有一支专业技术团队和良好的市场口碑。公司自成立以来，以质量为发展，让匠心弥散在每个细节，公司旗下实验耗材，医疗诊断耗材，科研耗材深受客户的喜爱。公司秉持诚信为本的经营理念，在仪器仪表深耕多年，以技术为先导，以自主产品为重点，发挥人才优势，打造仪器仪表良好品牌。上海登宁立足于全国市场，依托强大的研发实力，融合前沿的技术理念，飞快响应客户的变化需求。
