Q:浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
A: 首先，Amicon® Ultra超滤管的蛋白较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次，如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1）a
如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
） 是否选择了合适截留分子量的超滤管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？
b）使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
c）离心机较近是否有校准过？
d）是否尝试这个蛋白？如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的
蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用更小截留分子量的超
滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。
2）a
如果目的样本也不在滤过液中，那么：
）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？ b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。
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较大化样品回收率
浓缩液中的样本回收量低可能由于吸附损失、过度浓缩、或者样本穿过滤膜造成。
吸附损失取决于溶质浓度、其疏水性、温度、与过滤装置表面的接触时间、样本成分及pH值。 为较大限度地降低损失，离心后请立即取走浓缩后样本。
如果样本起始浓度高，请监视离心过程，以免使样本过度浓缩。 过度浓缩可导致沉淀和样本损失。
如果样本看起来渗过了滤膜，请选用较低MWCO的Amicon® Ultra-15装置。
以***膜为重点技术，默克密理博为蛋白、核酸、病毒、囊泡等生物样品和微珠（纳米颗粒）的浓缩、脱盐、换液提供多样化操作工具。您可以方便地从以下产品中，根据起始样品体积和特别的要求，选择较适合处理方案。 河南小型膜包Millipore密理博欢迎选购Millipore再生纤维素圆片超滤膜。
应用真空过滤水溶液、有机溶液或腐蚀液 体，进行颗粒污染分析。同时建议 对 HPLC 溶 剂 进 行 过 滤。 请 与 Merck Millipore 联系了解过滤有机溶液时可 使用的滤膜。 与液体接触的硼硅酸盐玻璃部件，其表面用磨砂玻璃密封。整合的底座和 盖与真空的连接处在滤液出口的上 方，可避免滤液吸入真空管。 禁止该换膜过滤器与可燃液体一起使 用。
应用： 浓缩含有抗原、抗体、酶、核酸（单株或双株DNA/RNA样本）、微生物、洗出液和净化样本的生物样本， 净化组织培养基提取液和细胞溶解液中的大分子成分，从反应混合液中去除引物、连接或分子标记，在HPLC之前去除蛋白质，除盐、更换缓冲液或渗滤
所提供的材料：Amicon® Ultra-15 10K装置包括一个盖子、一个过滤器和一个离心管。
预过滤 另一种延长过滤器寿命和过滤通量的方 法是在上方添加预过滤膜。有机溶剂通 常使用聚丙烯过滤器进行预过滤，孔径 在 0.6-30 µm 之间。这些聚丙烯过滤器先 用酒精湿润后，还可以用于水溶液中。 水溶液通常使用含有粘合树脂的玻璃纤 维预过滤膜净化，该预过滤膜具有较高 的湿强度，并能从严重污染的液体中提 取污染物。如果您担心玻璃纤维脱落可 使用密理博的 RW 型预过滤器，其使用的 是防脱落材料（形成围绕成聚脂网络的 纤维素酯的聚合物）。RW 型预过滤膜与 玻璃纤维过滤膜具有相同的纳污能力。Millipore纯化超滤管。
直接称重程序
大多数稀释蛋白的密度与水的密度大致相同 (即1 g/mL)。 利用这一特性，可通过称取浓缩液与滤过液重量并将其单位从克转化成毫升的方法，对其进行量化。 本方法适用于浓度不超过或约为20 mg/mL的溶液。
1. 使用之前，分别称取空的过滤装置、离心管和空的浓缩液收集管的重量。
2. 在过滤装置中加入溶液，然后重新称重。
3. 按说明组装装置和离心机。
4. 用移液管收集浓缩液，然后将其注入到已经预先称重的浓缩液收集管。
5. 从离心管上取下装置，然后称取离心管和浓缩液收集管的重量。
6. 减去空的装置/试管的重量，计算初始材料、滤过液及浓缩液的重量。
7. 化验初始材料、滤出液及浓缩液，以确定溶质浓度。
8. 使用重量/体积数据及所测出的浓度来计算回收量
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Ultrafree®-MC（0.5mL）和Ultrafree®-CL（2mL）是一次性使用的微滤离心管，可以用于各种水性样品和在某些溶剂中的样品除颗粒物、除沉淀的处理。提供两种体积及多种膜孔径以及已经经过无菌处理的产品供选择。Ultrafree®微滤离心管操作简便、样品回收率高且重复性很好，是蛋白和核酸样品处理的理想选择。特点与优点：有0.1-5.0μm五种膜孔径供选择采用高回收率的亲水Durapore® (PVDF)膜和亲水PTFE膜提供无菌包装和非无菌包装形式产品过滤速度快，数据稳定、重现性好上样体积为0.5mL (MC)或2mL (CL)配合1.5mL离心管固定转子(MC)或15mL离心管转子使用顶盖颜色标识易于区分膜孔径盒式超滤膜包Millipore密理博品牌
上海登宁科技有限公司是一家从事生物科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让，橡塑制品、实验室设备、仪器仪表、机电设备、汽车配件、摩托车配件、通讯设备、家用电器、机械设备、工具量具、电动工具、刀 具、五金交电、电线电缆、音响设备、计算机、软件及辅助设备、体育用品、办公用品、文具用品、安防设备、电子元器件的批发、零售。的公司，致力于发展为创新务实、诚实可信的企业。上海登宁作为从事生物科技领域内的技术开发、技术咨询、技术服务、技术转让，橡塑制品、实验室设备、仪器仪表、机电设备、汽车配件、摩托车配件、通讯设备、家用电器、机械设备、工具量具、电动工具、刀 具、五金交电、电线电缆、音响设备、计算机、软件及辅助设备、体育用品、办公用品、文具用品、安防设备、电子元器件的批发、零售。的企业之一，为客户提供良好的实验耗材，医疗诊断耗材，科研耗材。上海登宁不断开拓创新，追求出色，以技术为先导，以产品为平台，以应用为重点，以服务为保证，不断为客户创造更高价值，提供更优服务。上海登宁始终关注仪器仪表行业。满足市场需求，提高产品价值，是我们前行的力量。
