常规溶液过滤(NFF): 液体在压力或真空驱动下直接流过膜。大的颗粒物被膜截留并堆积在膜上,小分子则通过膜流出。NFF 常用于无菌过滤、澄清预过滤及病毒 / 蛋白样品制备等。切向流过滤(TFF): 液体流过时与膜表面呈一定角度,被膜阻挡的大颗粒物不会累积在膜表面,而且还会被切向流从膜表面扫除,因此 TFF 成为按分子大小不同分离的主流方法。TFF 在大体积样品处理中是主要的操作方法,而现在,TFF 技术被用于 Amicon® Ultra 离心式超滤管的设计中,使小体积样品的浓缩和分离操作也变得更加方便。上海Millipore过滤膜。陕西混合纤维素滤膜Millipore密理博诚信经营
如何使用Amicon® Ultra-15离心过滤器
1. 向Amicon® Ultra超过滤装置加入不超过15 mL的样本(如果使用定角转子则为12 mL)。
2. 将盖好盖子的过滤装置放入离心转子中,用一个类似的装置抵住。
3. 当使用摆桶转子时,以较大4,000 × g旋转约15–40分钟。
当使用定角转子时,装置的方向要使滤膜面板朝上,以较大5,000 × g旋转约15–40分钟。
说明: 关于典型旋转时间,请参见图1和表1。
4. 如要回收浓缩后的溶质,在过滤装置底部插入一个移液管,然后左右摇摆着吸取样本,以确保完全回收。 超滤液可以保存在离心管中。
说明: 要想达到理想回收,离心后请立即取走浓缩后样本。
滤膜Millipore密理博使用Millipore密理博8300型超滤杯。
超滤(UF)常用于分离溶液中极其微小的颗粒和不溶分子。虽然分离效果受到包括化学性质、电荷等多种因素影响,这种方法主要还是以分子大小为较基本的考虑。超滤膜截留1-1000kDa(MW)的分子,盐和水等小分子会透过,因此在大分子样品处理中得到了广阔应用。胶状或微粒状物质也能够被截留。UF膜既可以用于透过样品也用于保留样品的纯化。样品明显小于膜孔径,则经过膜处理可以达到除热源、澄清和与大分子污染物的分离的效果。如果目的分子远远大于膜孔径,膜处理则可以将小分子污染物去除而目的分子被浓缩。超滤方法相比沉淀法对于样品更温和,没有发生容易导致生物大分子失活的相变,而且在浓缩的同时可以完成对溶质的除盐。超滤的应用不限于蛋白样品的操作,也常用于核酸样品制备,包括分子克隆和质粒纯化。DNA和RNA样品起始浓度低至5ng/mL也可以被高效地在数分钟内被浓缩,回收率达到99%以上。离心方式的超滤方法进行溶液置换也被称为“渗滤”,操作时样品首先被浓缩,继而加入新的溶液,再次浓缩时,原溶液已经被换成选定的溶液。
通过超滤操作精确地将混在大分子中的小分子去除的想法常常不切实际。事实上,膜的规格描述是基于截留而非通过的性质。一项实验结果 显 示,采 用 100k NMWL 滤 膜,大 于 100kDa 的分子截留率>90%,但 这 时 比 膜 孔 径 小 的 分 子 并 不 是 完 全 自 由 地 通 过 滤 膜,75kDa 的分子截留率为 83%,30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的溶液中的各种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实践中,如果要分离两种大分子,它们之间的分子量差异应该达到 10倍以上,或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间,则可达到比较理想的分离。如果蛋白溶液较为稀释,低压下操作也有助于达到更好的效果Millipore聚碳酸酯膜用途。
Amicon® stirred cells 搅拌式超滤装置对于高浓度(百分之十的)大分子溶液快速浓缩和脱盐提供了的可行方法。做蛋白浓缩时,向超滤装置中导入气压,大于超滤膜截留分子量的溶质将被截留在容器内,水及小于超滤膜截留分子量的溶质(如盐分)会被过滤并排出。加压搅拌式设计防止浓缩的样品发生沉淀,比离心超滤温和,对于高浓度、易沉淀样品的进一步浓缩同时脱盐等应用是较佳选择。配套选择的超滤膜可以灭菌并经处理后反复使用,更为经济。上海登宁Millipore滤膜价格。陕西混合纤维素滤膜Millipore密理博诚信经营
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Ultrafree®-MC(0.5mL)和Ultrafree®-CL(2mL)是一次性使用的微滤离心管,可以用于各种水性样品和在某些溶剂中的样品除菌、除颗粒物、除沉淀的处理。提供两种体积及多种膜孔径以及已经经过无菌处理的产品供选择。Ultrafree®微滤离心管操作简便、样品回收率高且重复性很好,是蛋白和核酸样品处理的理想选择。
特点与优点
有0.1-5.0μm五种膜孔径供选择
采用高回收率的亲水Durapore® (PVDF)膜和亲水PTFE膜
提供无菌包装和非无菌包装形式产品
过滤速度快,数据稳定、重现性好
上样体积为0.5mL (MC)或2mL (CL)
配合1.5mL离心管固定转子(MC)或15mL离心管转子使用
顶盖颜色标识易于区分膜孔径
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