超滤(UF)常用于分离溶液中极其微小的颗粒和不溶分子。虽然分离效果受到包括化学性质、电荷等多种因素影响,这种方法主要还是以分子大小为较基本的考虑。超滤膜截留1-1000kDa(MW)的分子,盐和水等小分子会透过,因此在大分子样品处理中得到了广阔应用。胶状或微粒状物质也能够被截留。UF膜既可以用于透过样品也用于保留样品的纯化。样品明显小于膜孔径,则经过膜处理可以达到除热源、澄清和与大分子污染物的分离的效果。如果目的分子远远大于膜孔径,膜处理则可以将小分子污染物去除而目的分子被浓缩。超滤方法相比沉淀法对于样品更温和,没有发生容易导致生物大分子失活的相变,而且在浓缩的同时可以完成对溶质的除盐。超滤的应用不限于蛋白样品的操作,也常用于核酸样品制备,包括分子克隆和质粒纯化。DNA和RNA样品起始浓度低至5ng/mL也可以被高效地在数分钟内被浓缩,回收率达到99%以上。离心方式的超滤方法进行溶液置换也被称为“渗滤”,操作时样品首先被浓缩,继而加入新的溶液,再次浓缩时,原溶液已经被换成选定的溶液。上海登宁Millipore滤膜。四川超滤杯Millipore密理博用途
完整解决方案 化学相容性和溶出性 研究人员使用微滤膜去除各种水溶液和 有机溶剂中溶解的气体和颗粒。为了满 足其需要,默克密理博提供了具有广阔 化学相容性的膜。例如,Fluoro-pore ™疏 水性聚四氟乙烯膜可适用于过滤几乎所 有的有机溶剂,包括预湿后的强酸和碱 溶液。与其相比,Durapore® 聚偏氟乙烯 膜可更好地过滤水溶液,具有极低的蛋 白质吸附能力。 默克密理博的膜和过滤器由溶出度低的 聚合物制造,以确保您的过滤器在下游 能良好使用。 吸附作用 默克密理博的 Durapore(PVDF)和 Express (PES)膜经过表面改良,尽量减少吸附, 同时较大限度提高亲水性。用于溶出度 实验、食品和饮料的质量监控、土壤和 水质采样、过滤含有蛋白质添加剂的细 胞培养基。辽宁超滤膜Millipore密理博厂家Millipore密理博PVDF滤膜。
微孔滤膜的额定孔径通常以微米值给出, 大于此值的颗粒将被截留。微滤膜孔隙 范围从 0.025 µm(用于核酸和蛋白质的微 透析技术)到0.1-0.22 µm(用于除菌过滤), 到 0.3-0.45 µm(用于净化或微生物截留), 到 0.45-8.0 µm(用于空气或流体颗粒监 控)。孔径为 0.22 µm 的过滤器较常用于 除菌过滤,且足以去除细菌。但 如果溶液含动物血清,则需要使用孔径 为 0.1 µm 的过滤器来去除支原体。
膜直径 特殊应用所需的过滤器直径取决于过滤 溶液的体积和流速(流量)。 膜通量和过滤能力 过滤溶液的速度和效率取决于膜的过滤 能力(或通量)。当过滤大量或严重污 染的溶液如粗制细胞裂解物时,膜孔可 达到较大过滤能力,默克密理博 Express® (PES)膜过滤器具有较高过滤能力。其不对称的孔径设计使大颗粒保留在顶 部,不堵塞截留细菌的小孔,从而提高 过滤能力并延长过滤器的使用寿命。
超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的,适合各种蛋白研究,但在核酸和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏过,相对于球形蛋白需要更致密的膜(截留分子量更小)。所以选择滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH或离子强度改变的情况下倾向于聚集或改变构象,因此其有效大小可能比 “天然” 分子大很多,从而导致排阻增加。比如,有些蛋白质在某些缓冲液条件下会发生多聚化,而另一些则发生解聚(如血红素蛋白)成亚基。这使选择合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验,我们通常推荐选择为目的分子大小一半的膜作为尝试的起点,再根据实际情况加以调整。Millipore密理博聚四氟乙烯滤膜。
外泌小体(Exosome)是一种囊泡结构,直径通常在30-150nm,常见于正常体液和病理样本,培养细胞也可分泌。研究人员已经在血液、唾液、尿液、母乳等中发现外泌小体,其运载的蛋白和核酸涉及其细胞间物资、信息交流,影响和调控着多方面的生理功能,包括免疫促进、凋亡调控、血管生成、炎症反应及发育和分化等。由于在体液中出现,外泌小体对于临床生物标志物检测特别有利,成为体外诊断、biomarker研究的新热点。近年来随着分离纯化技术的提高,关于外泌小体的研究成果颇丰;这进一步吸引了越来越多领域的课题将外泌体纳入研究对象。研究的前提是方便、高效、标准化地分离纯化外泌小体。经过近20年的探索,已经建立了超速离心法、沉淀法、色谱法、亲和纯化法等。在大量实践中大家逐渐认识到根据下游研究对样品的要求,以及起始样品的规模、数量,可以选择不同的外泌体制备策略。因不需要特殊的设备和试剂盒,对操作人员也没有特别的经验要求,超滤法后来居上,成为实验室中制备外泌体的通用方法。Millipore聚碳酸酯膜用途。重庆纯水机耗材Millipore密理博规格
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Amicon® stirred cells 搅拌式超滤装置对于高浓度(百分之十的)大分子溶液快速浓缩和脱盐提供了的可行方法。做蛋白浓缩时,向超滤装置中导入气压,大于超滤膜截留分子量的溶质将被截留在容器内,水及小于超滤膜截留分子量的溶质(如盐分)会被过滤并排出。加压搅拌式设计防止浓缩的样品发生沉淀,比离心超滤温和,对于高浓度、易沉淀样品的进一步浓缩同时脱盐等应用是较佳选择。配套选择的超滤膜可以灭菌并经处理后反复使用,更为经济。四川超滤杯Millipore密理博用途
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