蛋白质截留率和浓缩液回收率
Amicon®超过滤装置滤膜的特征由截留分子量(MWCO)描述,即它们截留超过一定分子量的分子的能力。分子量接近MWCO的溶质可能只有部分被截留。滤膜的截留率取决于溶质的分子大小和形状。在大多数应用中,分子量是用来评估截留特性的一个方便的参数。为了获得较佳结果,请使用MWCO至少比要浓缩的蛋白质溶质分子量小两倍的滤膜
如何量化回收
使用以下方法计算总回收量、浓缩液回收率%及滤出液回收率%。 本程序可算出浓度较高约20 mg/mL的溶液的回收量近似值。
说明: 适当的化验技术包括吸收分光光度学法、放射免疫检定法、折光率及传导性。
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对于浓度很低及珍贵的样品,除了考虑截留效率和操作方便外,额外要关注的是采用的超滤膜及设备对目标蛋白的潜在非特异性吸附损失。不同膜材质对生物分子吸附程度不同,默克密理博的 Ultracel®再生纤维素膜在各类膜中对生物分子吸附较小,是 Amicon® Ultra超滤管等超滤产品成为首要选择关键之一。滤膜和装置表面对溶质的吸附对样品收率会产生直接影响,所以如果希望尽可能提高得率,就应该考虑采用较小的设备和膜面积。小量的、较为稀释的样品应该选用膜面积小的装置,同时保证一定的流速。默克密理博设计了一系列离心式或搅拌式装置,配合不同的膜面积、不同的截留分子量的切向流系统,支持您获得理想的处理效果。北京盒式超滤膜包Millipore密理博价格上海登宁Millipore一级代理。
微滤中膜的孔径大小通常以微米计,表示大于这一规格的颗粒将被膜截留。超滤膜根据 NMWL 分级,有时也用截留分子量(MWCO)。NMWL 表示大多数大于这个值的分子将在超滤时截留。一个确定NMWL 的超滤膜应该截留至少 90% 以上的这个大小的球形分子。但为了保险起见,实践中选择的膜孔径要小于目的分子。缓冲液置换时膜截留分子量应该充分大于流过的溶质。当膜材料相同时,孔径减小会增加排阻而减小滤过率。截留及产物回收的影响因素包括分子的形状、带电性质、样品浓度及组成成分、操作条件、使用的设备构造等。因此常常发生同样 NMWL 的膜对一定范围内的不同分子截留效果有一定差异的情况。使用超滤方法进行样品浓缩或除盐时,需要谨慎地选择合适的 NMWL 膜和设备。虽然影响因素较多,我们通常建议截留分子量约为目的分子分子量一半的膜,这样可以较大化样品的回收,同时节省过滤时间。
Centriprep®超滤管是一次性使用的离心管,可以用于2-15mL生物样品的纯化、浓缩、脱盐等过滤应用。这种离心超滤管流速很快,设计紧凑,螺旋盖使用起来非常方便,过滤收集管内置低吸附的Ultracel®再生纤维素膜,装有气密盖。优点与应用特有的反向流操作模式,较大的死体积,采用Ultracel®膜,用于浓缩和纯化富含颗粒物,的高浓度样品,样品回收率>90%,配合标准的50mL离心管吊篮式转子使用,从发酵培养基、细胞培养基、细胞裂解液中分,离低分子量溶质Millipore密理博PVDF滤膜。
超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的,适合各种蛋白研究,但在核酸和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏过,相对于球形蛋白需要更致密的膜(截留分子量更小)。所以选择滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH或离子强度改变的情况下倾向于聚集或改变构象,因此其有效大小可能比 “天然” 分子大很多,从而导致排阻增加。比如,有些蛋白质在某些缓冲液条件下会发生多聚化,而另一些则发生解聚(如血红素蛋白)成亚基。这使选择合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验,我们通常推荐选择为目的分子大小一半的膜作为尝试的起点,再根据实际情况加以调整。Millipore聚碳酸酯膜。江苏Millipore密理博规格
Millipore超滤管如何选择?上海登宁告诉你。陕西PTFE滤膜Millipore密理博材质
• 在过滤过程中,可进行自动、连续 溶剂和转移过滤。无需倾倒 • 2 L 的接收瓶包括瓶塞和储存用的导 管,避免过滤后溶液的转移,从而 降低了工作量和污染风险 • 圆锥形底 2 L 接收瓶可以储存全部 过滤的溶剂 / 缓冲液 MilliSolve 过滤系统专为在真空过滤液 相色谱(LC)缓冲液和溶剂设计的。 该系统使用 0.45 µm 表面滤膜来去除 可能会缩短色谱柱使用寿命的颗粒。 使用 MillSolve 系统进行真空过滤还会从缓冲液中去除大部分的溶解气体, 从而降低气泡影响 LC 设备的风险。 使用自动和连续过滤,在过滤过程中 无需向漏斗中添加液体。过滤在封闭 式系统中进行—这在过滤危险液体时 很重要。 如果要求开放式漏斗过滤,则可以使 用 300 mL 漏斗替换真空盖陕西PTFE滤膜Millipore密理博材质
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