通过超滤操作精确地将混在大分子中的小分子去除的想法常常不切实际。事实上，膜的规格描述是基于截留而非通过的性质。一项实验结果 显 示，采 用 100k NMWL 滤 膜，大 于 100kDa 的分子截留率>90%，但 这 时 比 膜 孔 径 小 的 分 子 并 不 是 完 全 自 由 地 通 过 滤 膜，75kDa 的分子截留率为 83%，30kDa 的分子也有 32% 被截留。混合的溶液中的各种成分通过膜并不像单一成分的溶液那么简单和容易。实践中，如果要分离两种大分子，它们之间的分子量差异应该达到 10倍以上，或至少膜的 NMWL 规格在两种蛋白之间，则可达到比较理想的分离。如果蛋白溶液较为稀释，低压下操作也有助于达到更好的效果Millipore聚碳酸酯膜用途。辽宁PTFE滤膜Millipore密理博规格
Q:浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
A: 首先，Amicon® Ultra超滤管的蛋白较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次，如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1）a
如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
） 是否选择了合适截留分子量的超滤管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？
b）使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
c）离心机较近是否有校准过？
d）是否尝试这个蛋白？如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的
蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用更小截留分子量的超
滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。
2）a
如果目的样本也不在滤过液中，那么：
）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？ b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。
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lC Millex 过滤器 专为离子色谱设计的 13 mm 和 25 mm 低溶出物过滤器。 IC Millex 过滤器提供两种孔径和两种直 径。13 mm 过滤器可用于过滤从 1 到 1O mL 的溶液。25 mm 过滤器可用于过 滤 10 到 100 mL 溶液。每批过滤器都通 过测试以确保符合密理博的质量控制标 准。标准包括：泡点、流速、外壳压力、 下游颗粒和 IC 级别。每一个包装盒中 都有完整技术指标的质量证书。低吸附性、低溶出的聚四氟乙烯（PTFE）膜 可用于去除水和温和有机溶液中的微粒，使 IC 色谱更清晰。外壳由低溶出性、高密度的 聚乙烯（HDPE）制造。此外，每个过滤器单 独包装以减少外部颗粒污染的危险。
常规溶液过滤（NFF）: 液体在压力或真空驱动下直接流过膜。大的颗粒物被膜截留并堆积在膜上，小分子则通过膜流出。NFF 常用于无菌过滤、澄清预过滤及病毒 / 蛋白样品制备等。切向流过滤（TFF）: 液体流过时与膜表面呈一定角度，被膜阻挡的大颗粒物不会累积在膜表面，而且还会被切向流从膜表面扫除，因此 TFF 成为按分子大小不同分离的主流方法。TFF 在大体积样品处理中是主要的操作方法，而现在，TFF 技术被用于 Amicon® Ultra 离心式超滤管的设计中，使小体积样品的浓缩和分离操作也变得更加方便。Millipore混合纤维素膜价格。
超滤过程中需要在速率和回收率之间平衡以期获得较好的效果。滤膜的通量的定义是流量除以面积，使用高 NMWL 滤膜可以增加通量，但同时会降低回收率。选择膜和装置时需要同时考虑截留分子量和通量。而参与影响通量的因素很多，包括：压力：较为稀释的蛋白溶液或胶体悬液进行超滤时，流量随着跨膜压力（TMP）的增大而增加。正压条件下操作，如 Stirred Cell 搅拌式超滤杯，这种因素影响较为明显。如果极化影响明显，通量会达到一个平台，甚至可能随着压力的增加而降低。浓度：当需要截留的样品浓度很低时，通量通常不受浓度影响。操作过程中，随着溶质浓度的升高，增加的粘滞性和极化将导致通量降低。 上海Millipore过滤膜的特点分析。江苏过滤系统Millipore密理博用途
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如何使用Amicon® Ultra-15离心过滤器
1. 向Amicon® Ultra超过滤装置加入不超过15 mL的样本（如果使用定角转子则为12 mL）。
2. 将盖好盖子的过滤装置放入离心转子中，用一个类似的装置抵住。
3. 当使用摆桶转子时，以较大4,000 × g旋转约15–40分钟。
当使用定角转子时，装置的方向要使滤膜面板朝上，以较大5,000 × g旋转约15–40分钟。
说明： 关于典型旋转时间，请参见图1和表1。
4. 如要回收浓缩后的溶质，在过滤装置底部插入一个移液管，然后左右摇摆着吸取样本，以确保完全回收。 超滤液可以保存在离心管中。
说明： 要想达到理想回收，离心后请立即取走浓缩后样本。
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