非连续渗滤是换液的一种操作方法，即先浓缩到一定浓度再稀释到起始的体积，并多次重复这个操作，直到溶液中的盐或溶剂被去除或降到需要的浓度。而连续渗滤（保持恒定体积）是将超滤杯经转换装置（目录号6003）与补液杯（目录号6028）连接，使供气压和液体流转。连接有转换装置时，不必停下系统的运转就可以即时进行浓缩和渗滤之间的切换，将两种操作模式的优点集中在一起，有利于敏感的（蛋白）样品在较恒定、温和的条件下高效换液。Millipore密理博聚四氟乙烯滤膜。山东滤膜Millipore密理博材质
蛋白质截留率和浓缩液回收率
Amicon®超过滤装置滤膜的特征由截留分子量（MWCO）描述，即它们截留超过一定分子量的分子的能力。分子量接近MWCO的溶质可能只有部分被截留。滤膜的截留率取决于溶质的分子大小和形状。在大多数应用中，分子量是用来评估截留特性的一个方便的参数。为了获得较佳结果，请使用MWCO至少比要浓缩的蛋白质溶质分子量小两倍的滤膜
如何量化回收
使用以下方法计算总回收量、浓缩液回收率%及滤出液回收率%。 本程序可算出浓度较高约20 mg/mL的溶液的回收量近似值。
说明： 适当的化验技术包括吸收分光光度学法、放射免疫检定法、折光率及传导性。
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Q:浓缩后发现浓缩液中没有目的蛋白，可能的原因有哪些？
A: 首先，Amicon® Ultra超滤管的蛋白较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次，如果问题仍然出现，请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因：
1）a
如果目的样本在滤过液中，那么请排查：
） 是否选择了合适截留分子量的超滤管（目的蛋白分子量的1/2或者1/3）？
b）使用的离心力是否是在限定范围内？如果使用的是rpm，请换算成相应的g离心力，具体换算方法请垂询。
c）离心机较近是否有校准过？
d）是否尝试这个蛋白？如果能确保用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话，那么有可能是这个目的
蛋白的原因。有时蛋白会因其本身的一些特性（构象差异）而影响浓缩效果，建议选用更小截留分子量的超
滤管（如原本选用30k，此时可以选择10k）。
2）a
如果目的样本也不在滤过液中，那么：
）蛋白样本起始浓度是否大于25ug/mL？ b）用来确定样本浓度的方法是什么？是否可信？
c）目的蛋白是不是沉淀了？如果是，具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。
超滤（UF）常用于分离溶液中极其微小的颗粒和不溶分子。虽然分离效果受到包括化学性质、电荷等多种因素影响，这种方法主要还是以分子大小为较基本的考虑。超滤膜截留1-1000kDa（MW）的分子，盐和水等小分子会透过，因此在大分子样品处理中得到了广阔应用。胶状或微粒状物质也能够被截留。UF膜既可以用于透过样品也用于保留样品的纯化。样品明显小于膜孔径，则经过膜处理可以达到除热源、澄清和与大分子污染物的分离的效果。如果目的分子远远大于膜孔径，膜处理则可以将小分子污染物去除而目的分子被浓缩。超滤方法相比沉淀法对于样品更温和，没有发生容易导致生物大分子失活的相变，而且在浓缩的同时可以完成对溶质的除盐。超滤的应用不限于蛋白样品的操作，也常用于核酸样品制备，包括分子克隆和质粒纯化。DNA和RNA样品起始浓度低至5ng/mL也可以被高效地在数分钟内被浓缩，回收率达到99%以上。离心方式的超滤方法进行溶液置换也被称为“渗滤”，操作时样品首先被浓缩，继而加入新的溶液，再次浓缩时，原溶液已经被换成选定的溶液。Millipore聚醚砜PES滤膜。
lC Millex 过滤器 专为离子色谱设计的 13 mm 和 25 mm 低溶出物过滤器。 IC Millex 过滤器提供两种孔径和两种直 径。13 mm 过滤器可用于过滤从 1 到 1O mL 的溶液。25 mm 过滤器可用于过 滤 10 到 100 mL 溶液。每批过滤器都通 过测试以确保符合密理博的质量控制标 准。标准包括：泡点、流速、外壳压力、 下游颗粒和 IC 级别。每一个包装盒中 都有完整技术指标的质量证书。低吸附性、低溶出的聚四氟乙烯（PTFE）膜 可用于去除水和温和有机溶液中的微粒，使 IC 色谱更清晰。外壳由低溶出性、高密度的 聚乙烯（HDPE）制造。此外，每个过滤器单 独包装以减少外部颗粒污染的危险。Millipore聚碳酸酯膜。江苏混合纤维素滤膜Millipore密理博代理
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超滤膜的 NMWL 是用球形蛋白标定的，适合各种蛋白研究，但在核酸和多糖纯化时则要考虑更多因素。这些分子的棒状的三维结构容易漏过，相对于球形蛋白需要更致密的膜（截留分子量更小）。所以选择滤膜是更多考虑的是核苷酸长度而非分子量。截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH或离子强度改变的情况下倾向于聚集或改变构象，因此其有效大小可能比 “天然” 分子大很多，从而导致排阻增加。比如，有些蛋白质在某些缓冲液条件下会发生多聚化，而另一些则发生解聚（如血红素蛋白）成亚基。这使选择合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验，我们通常推荐选择为目的分子大小一半的膜作为尝试的起点，再根据实际情况加以调整。山东滤膜Millipore密理博材质
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