对新环境的探索确保了生存和进化的适应性,这是通过根据经验动态变化的探索性回合和逮捕来表达的。因此,调节探索性行为的神经环路应该参与经验的整合,并利用它来选择适当的行为输出。通过空间探索分析,研究人员发现在之前动物被逮捕的地点,瞬间逮捕数随着经验的增加而增加。在自由探索的小鼠身上进行的Inscopix钙成像显示,基底外侧杏仁核中有一个遗传和投射定义的神经元群,在自我控制的行为停止期间是活跃的。这个合集是以经验依赖的方式响应的,对这些神经元的nVoke闭环光遗传操作表明,它们在探索过程中驱动经验依赖的逮捕是充分和必要的。投影特异性成像和光遗传学实验显示,这些yizhi是由投射到**杏仁核的基底外侧杏仁核神经元影响的,揭示了杏仁核环路,该回路介导了熟悉部位的短暂阻止,但不影响回避或焦虑/恐惧样行为。清醒动物脑功能钙成像的微型显微镜的研究在不断实践中。哈尔滨荧光钙成像nVoke2.0
指示剂是如何负载细胞,目前有三种在神经元上填充钙离子指示剂的方法,且都可以用于体内和体外研究。第一种方法是利用玻璃吸管将膜渗透性盐或葡聚糖形式的指示剂注入单个神经元中。此方法方便实验者控制单个神经元内的钙离子指示剂浓度且信噪比较高。第二种是利用“批量加载”的方法将钙离子指示剂染料负载神经元,观察对象为一群神经元。尽管此方法可能导致一些胶质细胞也被指示剂所标记,但明显提高了整体神经元的标记百分比,使研究者得以观察到一群神经元内动作电位相关性的活动。第三种也较为常用,通过病毒转染的方式使其基因编码钙离子指示剂。江苏inscopix钙成像联系方式钙成像系统集成自动控制和精确计时的多模式输入端口。
钙离子在很多生理性的活动中都发挥着重要作用,除了在肌肉细胞收缩中扮演着重要角色,钙离子也是神经元活动的重要“风向标”之一:当神经元膜电位发生去极化,产生的动作电位传导到神经元轴突末梢时,细胞膜上的电压门控钙离子通道打开,大量钙离子内流,包含神经递质的囊泡由突触前膜释放至后膜,下游神经元就得以接受到上游的信号。因此,钙离子成像可以追踪神经元动作电位,从而帮助我们了解神经元集群的活动,可以用于感知觉,学习记忆,社会性行为等各种各样的研究中。
细胞内钙离子作为重要的信号分子其作用具有时间性和空间性。当di1个细胞兴奋时,产生了一个电冲动,此时,细胞外的钙离子流入该细胞内,促使该细胞分泌神经递质,神经递质与相邻的下一级神经细胞膜上的蛋白分子结合,促使这一级神经细胞产生新的电冲动。以此类推,神经信号便一级一级地传递下去,从而构成复杂的信号体系,*终形成学习、记忆等大脑的高级功能。在哺乳动物神经系统中,钙离子同样扮演着重要的信号分子的角色。静息状态下大部分神经元细胞内钙离子浓度约为50-100nM,而细胞兴奋时钙离子浓度能瞬间上升10-100倍,增加的钙离子对于突触囊泡胞吐释放神经递质的过程必不可少。众所周知,只有游离钙才具有生物学活性,而细胞质内钙离子浓度由钙离子的内外流平衡所决定,同时也受钙结合蛋白的影响。细胞外钙离子内流的方式有很多种,其中包括电压门控钙离子通道、离子型谷氨酰胺受体、烟碱型胆碱能受体(nAChR)和瞬时受体电位C型通道(TRPC)等。神经元钙成像的原理就是利用特殊的荧光染料或钙离子指示剂将神经元中钙离子浓度的变化通过荧光强度表现出来,以反映神经元活性。该方法可以同时观察多个功能或位置相关的脑细胞。钙成像技术在神经科学研究中的应用。
可见光激发Ca2+荧光探针与紫外光激发探针相比,可见光激发Ca2+探针具有更强的染料吸收性能,对Ca2+变化水平检测敏感度也更高,能够降低对活细胞的光毒性和样品自发荧光以及光散射的干扰,且无光谱偏移。常使用的可见光激发Ca2+荧光探针有Fluo-3,Fluo-4,Rhod-2等,同时他们也都是非比率型指示剂。Fluo-3是常用的可见光激发Ca2+荧光指示剂之一,是典型的的单波长指示剂,比较大激发波长为506nm,比较大发射波长为526nm。它与Ca2+结合之前几乎无荧光,结合后荧光会增加60至100倍,从而避免了细胞自身的荧光干扰。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右,发射波长为525~530nm。Fluo-3可以用在激光共聚焦显微成像或流式细胞仪中。它还有一个升级版本Fluo-4,在相同Ca2+浓度下信号更强。进行钙测定必须借助外界的某种可视化物质作为它的标志物。美国光遗传钙成像大概费用
钙信号在神经元功能调控及信息传递方面发挥着重要作用。哈尔滨荧光钙成像nVoke2.0
钙离子成像技术(Calciumimaging)是指利用钙离子指示剂监测组织内钙离子浓度的方法,常用于神经系统的研究,指示神经元内钙离子的变化,提示神经元活动。其原理在于借助钙离子浓度与神经元活动之间的严格对应关系,利用特殊的荧光染料或者蛋白质荧光探针(钙离子指示剂,