同样唾液和口腔拭子中核酸提取方法与血液的提取方法相似包括以下4个过程:1.通过裂解液裂解口腔脱落细胞,释放核酸物质。2.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质,去除其他杂质。3.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。4.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。传统的提取方法由于核酸提取纯化过程耗时长,成本较高,步骤繁多,增加了基因污染的风险。因此需要一种血液、唾液和口腔拭子样本经过简单处理就可以作为模板进行荧光PCR扩增检测方法,满足科研和医学领域快速检测的要求。技术实现要素:本发明提供了一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。该发明通过快速简单处理口腔拭子和血液样本,且无需纯化可直接用于荧光PCR扩增的DNA。10分钟内即可得到应用于ARMS-PCR反应体系的模板DNA。同时优化ARMS-PCR荧光体系,在反应液中加入防污染UDG酶以及提高Taq酶稳定性的的BSA,从而实现血液和口腔拭子基因组快速荧光PCR扩增检测。该方法快速简单,成本低廉,检测灵敏,且用该方法提取的基因组与商品化试剂盒提取的基因组的检测结果相近。口腔拭子有着独有的喷射式植入尼龙纤维技术,增加标本的采集及释放量。江西口腔拭子

具体步骤如下:1,提**0分钟先用清水漱口(不用牙膏,尤其是母乳的婴儿需要喝几口清水,也不用漱口水);2、在信封上用笔作好标记(比如:父亲、母亲或孩子)和采集日期,姓名.3、一手持华晨阳基因采样棉签,伸进口腔左(右)内侧颊粘膜处稍用力反复擦拭15-20下(边擦拭边转动基因采样棉签),取出基因采样棉签,放在信封或者白纸上、阴干十多分钟待口水完全干掉;(擦拭的具**置是腮边或者说脸颊腮帮子内部——打个比方,大人捏孩子脸蛋的那个位置,从口腔里擦拭)4、同样的方法采集第二根棉签(另一侧),每个人一侧各提取三根(共六根)基因采样棉签;5、阴干后的基因采样采集棉签分别装入已做好标记的信封中密封(请不要用胶袋或者保鲜膜装采样棉签)。6,将取好的样本尽早拿到实验室做PCR实验,您也可以选择邮寄到实验室或者医院7,我公司接收样本、签定DNA委托申请表(代合同)、付款事宜、10个工作日出结果。取好的基因采样拭子棉签样本请不要自行保管超过一个星期,尽早快递到我们实验室以确保样本不受污染。特殊样本的取样操作方法请咨询客服(比如在对方不知情的情况下或者取孩子样本需要高度保密的情况)。江西口腔拭子包装后的拭子应贮存在2℃ ~30℃,相对湿度40%~90%的无腐蚀性气体、通风良好、阴凉干燥、清洁的环境中。

加入20μteinaseK溶液,混匀。加入200μL缓冲液GB,充分颠倒混匀,在56℃放置14min(期间颠倒混合样品数次),溶液应变清亮,若未完全变清亮,延长裂解时间至完全变清亮。加人200μL无水乙醇,充分振荡混匀10s,此时可能会出现絮状沉淀。将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm离心30s,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入500μLGD(已加入无水乙醇),12,000rpm离心30s,弃废液,将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入600μLPW(已加入无水乙醇),12,000rpm离心30s,弃废液,将吸附柱CB3放回收集管中。12,000rpm(~13,400×g)离心2min。将吸附柱放置新的,以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。向吸附柱中悬空滴加50~200μL洗脱缓冲液,室温放置2~5分钟,12,000rpm(~13,400×g)离心2min,将溶液收集到离心管中,测定浓度及纯度后,取3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。用本发明和对照产品对8份样本同时进行荧光PCR扩增。结果如图6,本发明所有反应孔背景信号好、Ct值都在21~25之间,荧光扩增曲线呈典型的S型。
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深圳市华晨阳科技有限公司是一家致力于核酸检测、分子诊断、医学检验、病毒检测等产品研发、生产、销售于一体的国家高新技术企业。公司拥有二十多项**,部分专利已经转化应用于市场。产品主要应用于基因检测、医疗机构、生物制药、大型甲等医院、出入境检验检疫、诊断试剂、疾控机构、刑侦法医鉴定等。近年来,公司不断加大自主研发投入,积极引进人才和技术,并与国内外多家科研机构、医学检验所以及三甲医院、基因检测公司、疾病预防控制中心等科研机构有着紧密合作,促进人类健康产业大发展。