如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗:广义上是指专门和进行特异性反应和结合的抗体,在免疫学反应中,经常需要针对试验选择不同的二抗,艾美捷能为您的科研工作提供**适合和*****的二抗产品。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,同时在后继试验中也会有不同的检测方案,因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求。一般来说,选择合适的一抗需要从下面几个方面考虑:【一抗的种属来源】二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源,例如:如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体,二抗则选抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可);如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体,则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。即根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。艾美捷能为您提供**全的抗不同种属的原装进口二抗,包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。 及不可见反应,能阻抑抗原与其完全结合的不完全抗体。昆明Santa cruz抗体供货商
单克隆抗体:
(monoclonal antibody,McAb)克隆选择学说:淋巴细胞在与抗原接触前就已经存在多种多样的与抗原专一性结合的受体,一种细胞带一种受体,进入机体的抗原选择性的结合其中的个别淋巴细胞,使之活化,增殖产生大量带有同样受体的细胞群,分泌同样的抗体。当抗原进入体内,在机体中就会诱导出针对不同抗原决定簇的多种抗体,如果要把这些抗体一一分开,用现有的生物化学或物理化学方法是根本办不到的。1975年科勒(Koehller)和米尔斯坦(Milstein)将小鼠免疫细胞与**细胞融合,培养出既能迅速生长繁殖又可分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。从而获得针对某一特殊抗原决定簇的单克隆抗体。 昆明Santa cruz抗体供货商市场上动物血清抗体大致分为兽抗体和禽抗体。
首先抗体的选择:分析自己实验应用的实验方法是哪种?一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于WB、IHC、ICC、ELISA、FCM分析等。分析自己实验中标本的种属是哪种动物或人的?一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种动物或人的标本,如:可以用于rat、mouse、human、pig、goat等动物的标本的实验。也就是说应选择物种相同或有交叉反应的抗体,抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应,因其氨基酸序列同源性较高。
B细胞分化及抗体的产生;哺乳类动物B细胞的分化过程主要可分为前B细胞、不成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞和浆细胞五个阶段。其中前B细胞和不成熟B细胞的分化是抗原非依赖的,其分化过程在骨髓中进行,不成熟B细胞开始表达膜结合型IgM(mIgM)。抗原依赖阶段是指成熟B细胞(膜表面同时表达mIgM和mIgD)在抗原刺激后,在APC和TH细胞的辅助下成为活化B细胞(mIg水平逐渐降低,分泌型Ig逐渐增加,并可发生Ig基因重链的类别转换),并继续分化为合成和分泌抗体的浆细胞,发挥体液免疫的功能,这个阶段的分化主要是在外周免疫***中进行的。 按抗体的来源,可将其分为天然抗体和免疫抗体。
凡能产生抗体的高等动物(包括人类),当注入胸腺依赖性抗原(TD抗原)进行免疫时都有着相同产生抗体的规律,即存在初次免疫应答(primaryimmuneresponse)和再次免疫应答(secondaryimmuneresponse)。
初次免疫应答是指机体***次接触某种抗原物质引起特异性抗体产生的过程。其特点是潜伏期长(一周以上),产生的抗体滴度(效价)低、维持的时间短,产生的抗体以IgM为主。
再次免疫应答是指机体以后再次接触同样的抗原后所产生的抗体应答过程。其特点是产生抗体的潜伏期短、抗体滴度高,维持的时问长,产生的抗体以IgG为主。 抗体构成:以免疫球蛋白为主。犬抗体二抗
沉淀素指与抗原结合后可发生沉淀反应的抗体。昆明Santa cruz抗体供货商
第二抗体是能和抗体结合,即抗体的抗体,其主要作用是检测抗体的存在,放大一抗的信号。二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质,对异种动物进行免疫,由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白。如用抗AIVHs亚型血凝素单克隆抗体为包被抗体兔抗AIVIgG为第二抗体。由于二抗所具备的优点使得其在免疫学实验中得以应用大面积,如westernblot(通过与特异性抗体结合来鉴定蛋白质),ELISA(以耦联有酶的抗体或抗原为标记来检测特异性的蛋白质,尤其是相应的抗原或抗体),免疫组织化学(检测组织中的特异性抗原),兔疫细胞化学(通过免疫学方法检测细胞的抗原组成),流式细胞术(通过检测激光所激发荧光来鉴定分离不同类型的细胞)及免疫沉淀(通过抗原与抗体的特异性结合作用来分离相应抗原)。二抗针对某一特定物种(如小鼠)的所有抗体均具有特异性,因而使用标记的二抗可以免去对每一个一抗进行标记,很大节省了时间和费用;此外,一个一抗分子可以同时结合几个二抗分子,从而使信号很大增强,提高了实验灵敏度。 昆明Santa cruz抗体供货商
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