河南HE染色原理

实验室常用人工染料（5）中性红：

中性红是弱碱性染料，呈红色粉末状，能溶于水(溶解度4%)和酒精(溶解度1.8%)。它的碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，所以能用作指示剂。中性红无毒，常做***染色的染料，用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液，用作显示尼尔体的常用染料。

番红：

番红是碱性染料，能溶于水和酒精。番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料，能染细胞核、染色体和植物蛋白质，示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织，还能染孢子囊。 普鲁士蓝法 反应显示三价铁染色结果：含铁血黄素蓝色，其他浅红色。河南HE染色原理

冷冻切片HE染色步骤:（1）冰冻切片固定10～30s

（2）稍水洗1～2s

（3）苏木**染色（60℃）30～60s

（4）流水洗去苏木**5～10s

（5）1%盐酸乙醇1～3s

（6）稍水洗1～2s

（7）促蓝液返蓝5～10s

（8）流水冲洗15～30s

（9）0.5%曙红液染色30～60s

（10）蒸馏水稍洗1～2s

（11）80%乙醇1～2s

（12）95%乙醇1～2s

（13）无水乙醇1～2s

（14）石炭酸二甲苯2～3s

（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s

（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s

（17）中性树胶封固

注：第（14）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。

染色结果：细胞核蓝色，胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。

注意事项：

切片脱水透明，切片经HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水，也可使用石炭酸二甲苯进行脱水。石炭酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。 甘肃天狼星红染色方法HE染色的适用范围:组织学、胚胎学、病理学教学与科研。

染色体染色剂：配方一、醋酸-洋红染液

取45ml冰醋酸，加蒸馏水55ml，煮沸后徐徐加入洋红1g，搅拌均匀后加入1颗铁锈钉，煮沸10min，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。

配方二、醋酸-地衣红染液

取45ml醋酸，跟55ml蒸馏水相混，加热，徐徐加入地衣红粉末1~2g，搅拌溶解后，缓缓煮沸2小时，冷却后过滤，贮存在棕色瓶里。

配方三、龙胆紫染液

取1g龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后，加蒸馏水，稀释到100ml，保存在棕色瓶内。

配方四、甲苯胺蓝染液

取0.5g甲苯胺蓝，溶解在100ml蒸馏水中，即成0.5%甲苯胺蓝水溶液。

（1）*与肉瘤的鉴别：在网状纤维染色下可清楚显示出肉瘤每一个细胞周围有网状纤维围绕，或似为团状或巢状的瘤组织，但团巢内仍有破碎的网状纤维，*显示为明显巢或索状，巢内无网状纤维。

（2）骨基质与浓缩的分泌物、血浆或水肿液的鉴别：骨基质内有网状纤维，而后者无。

（3）炎症细胞与*细胞的鉴别：在支气管活检中有时挤压较重，一些深染的细胞挤压成团，难以判断是受挤压的炎症细胞。这种病例染网状纤维有利于鉴别，炎症细胞不成巢，小细胞*可有巢状或索状结构。 HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中**基本、使用*****的技术方法。

    Masson染色法试剂：Regaud氏苏木精：苏木精1g，95%酒精10ml，甘油10ml，蒸馏水80ml将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用Masson丽春红酸性复红液：丽春红，酸性复红，蒸馏水99ml，冰醋酸1ml：冰醋酸ml，蒸馏水100ml1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g，蒸馏水100ml苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g，蒸馏水98ml，冰醋酸2ml1%光绿水溶液：光绿1g，蒸馏水100ml步骤：1．石蜡切片脱蜡至水2．铬化处理或去汞盐沉淀（甲醛固定的组织此步可略）3．依次自来水和蒸馏水洗4．用Regaud苏木精染液或Weigert苏木**染核5-10min5．充分水洗,如过染可盐酸酒精分化6．蒸馏水洗7．用Masson丽春红酸性复红液5-10min8．2%冰醋酸水溶液浸洗片刻9．1%磷钼酸水溶液分化3-5min10．不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min11．以12．95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色（如光绿液染色为绿色），胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。注意事项：1．组织固定起着很重要的作用，根据不同的固定液可延长或缩短染色时间2．磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用，分化时镜下控制，肌纤维和纤维素呈红色，胶原纤维呈淡粉红色即可。 甲苯胺蓝法：将肥大细胞染色；肥大细胞紫红色，背景呈蓝色。浙江荧光染色上机

衰老的细胞由于代谢缓慢或停止，不能使美蓝还原，所以呈蓝色或者淡蓝色。河南HE染色原理

植物相关常用染色方法（2）：油脂：在植物解剖学研究中，常用苏丹Ⅲ（或苏丹 IV) 溶液对脂肪性物质进行染色切片浸入上述溶液中 24h, 然后用 50% 的酒精洗涤，加上甘油后观察，油脂可被染成淡黄至红色，栓质和角质也同样被染色。如果细胞中存在硬脂或脂肪酸结晶时，染色十分缓慢，可稍加热。

单宁：单宁的化学结构比较复杂，它是一种多元酚的衍生物，大多呈胶体状态，存在于植物细胞的液泡中，或形成单独的液泡。将切片浸人 10% 的氯化铁水溶液中（或加－些碳酸钠），单宁物质则被染成蓝绿色。

橡胶：天然橡胶是异戊二烯的聚合物，植物组织中所含橡胶物质大多存在千乳汁管中，也有的存在于液泡中。对存在于乳汁管中的橡胶成分，可以用苏丹Ⅲ溶液染色材料应先用 10%铬酸 +70%酒精（使用前配制）固定 24h, 以使橡胶凝固，用刀片切去1-2mm, 而后徒手切片，于载玻片上加上苏丹Ⅲ或苏丹 Ⅳ溶液染色，乳汁管中的橡胶类物质被染成红色。 河南HE染色原理

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