番红染液的运用特点:
番红通常具有红色成团的化学成像结构(有时被描述为二甲基番红)。同时也有三甲基番红,其在下环的邻位有多加一个甲基。这两个化合物在生物染色应用的表现基本上是相同的,所以大部分番红的制造商并无法区分这两者。商业用番红的配制经常会包含这两种类型的混合。
番红也在分析化学中被用作氧化还原指示剂。
番红是个在一分子中含有两个氮原子的化合物,其为对称的2,8-二甲基-3,7-二氨基吩嗪。可以借由连接一分子氧化的对位-二氨和两分子的一级氨取得。
这是透过对位-氨基偶氮与一级氨的浓缩以及对位-亚硝基二烷基苯胺和二级碱基,例如二苯基间苯二胺,之间的反应。它们为呈现出特有绿色金属光泽的结晶固体;在水中立即被溶解并能染成蓝色或紫色。
同时也是可形成稳定的一元酸盐类的强碱。它们的酒精溶液会显现出红黄色的萤光。酚藏红在自由态时十分不稳定;它的氯化物会形成绿色的板块。其很容易就重氮化,而重氮化的盐类与酒精煮沸后会产生阿朴藏红或引杜林染料,C18H12N3。 透明骨骼标本染色剂配方一:茜素红染液(Ⅰ) 取冰醋酸5毫升、甘油5毫升、1%水合氯醛60毫升混合。河南油红染色原理
实验室常用人工染料(6)亚甲蓝或美蓝:
亚甲蓝或美蓝是碱性染料,呈蓝色粉末状,能溶于水(溶解度9.5%)和酒精(溶解度6%)。亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料,其优点是染色不会过深。
甲基绿:
甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状,能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是**有价值的细胞和染色剂,细胞学上常用来染染色质,跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。
用这些染料配备而成的染液有很多,例如:吕氏(Loeffer)碱性美蓝染液,齐氏(ziehl)石炭酸复红染液等。 流式染色上机甲苯胺蓝法:将肥大细胞染色;肥大细胞紫红色,背景呈蓝色。
甲苯胺蓝染色法 :1. 甲苯胺蓝液
甲苯胺蓝0.5g蒸馏水定容至100ml
2. 冰醋酸液
冰醋酸0.5ml蒸馏水定容至100ml
染色步骤:
1.组织切片常规脱蜡至水
2.入甲苯胺蓝液30min
3.稍水洗
4.入冰醋酸液分化,直到胞核和颗粒清晰。
5.稍水洗,用冷风吹干
6.二甲苯透明,中性树胶封固
(二)
①切片脱腊至水。
②蒸馏水浸洗3次。
⑤0.1%甲苯胺蓝液浸染10min。
④水洗,洗去多余染液。
⑤各级酒精脱水。
⑥二甲苯透明,中性树胶封固。
试剂的配制
称取0.1g甲苯胺蓝,溶于100ml 0.1M 醋酸盐缓冲液中,置室温5天后,即可使用染液于室温下可保存3个月,若放于4℃水箱则可保存半年左右,但该液的染色效果在早期为比较好,若染液存放时间较长,则染色偏淡,应适应延长染色时间。
HE染色的试剂与仪器A:0.5~1%的伊红酒精溶液:
称取伊红Y0.5~1g,加少量蒸馏水溶解后,再滴加冰醋酸直至浆糊状。以滤纸过滤,将滤渣在烘箱中烤干后,以95%酒精(即工业酒精,如果不怕浪费,用无水乙醇配制也可)100毫升溶解。
B:苏木素染液配方:(配制3000ml,可按比列减少)
苏木精6g
无水乙醇100ml
硫酸铝钾150g
蒸馏水2000ml
碘酸钠1.2g
冰醋酸120ml
甘油900ml
配制方法:将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水,溶解后将甘油倾入一起混合,***加入冰醋酸和碘酸钠。
C:1%盐酸酒精分化液:将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。 醛品红法:将HBsAg,弹力纤维及脂褐素双重染色;HBsAg阳性物质紫色,弹力纤维、脂褐素紫色至深紫色。
实验室常用人工染料(5)中性红:
中性红是弱碱性染料,呈红色粉末状,能溶于水(溶解度4%)和酒精(溶解度1.8%)。它的碱性溶液中呈现黄色,在强碱性溶液中呈蓝色,而在弱酸性溶液中呈红色,所以能用作指示剂。中性红无毒,常做***染色的染料,用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液,用作显示尼尔体的常用染料。
番红:
番红是碱性染料,能溶于水和酒精。番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料,能染细胞核、染色体和植物蛋白质,示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织,还能染孢子囊。 PAS染色原理:过碘酸能使细胞内多糖乙二醇基氧化成二醛,再与Schiff氏液无色品红结合呈红色定位于胞浆上。陕西荧光染色方法
美蓝染料***染色时,由于活细胞代谢过程中的脱氢作用,美蓝接受H后就由氧化转变为还原态,故表现出无色。河南油红染色原理
显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法的染色步骤:
(1)中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水。
(2)高锰酸钾硫酸液氧化3min后,自来水浸洗后,用2%草酸漂白2min.
(3)5%硫酸铁铵1min.
(4)Gomori氨性银改良液染1min.
(5)蒸馏水洗2次,用15%甲醛液还原1min.
(6)蒸馏水洗2次,氯化金30s,蒸馏水洗1次。
(7)70%乙醇浸一次,再浸入维多利亚蓝液中染30min-1h.
(8)95%乙醇分化1min左右。
(9)浸入蒸馏水中1min后,用丽春红S染色液染色2min.
(10)直接用无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
3.结果
胶原纤维呈红色,网状纤维呈黑色,弹力纤维呈绿色,肌肉和红细胞呈淡黄色。
4.注意事项
氨性银液滴染时,要用干净吸管,防止银液污染而发生沉淀。氨性银液作用后的切片不能倾倒,应将蒸馏水冲洗切片上的银液,这样就不会使银液表面的银挥发.
颗粒而沉积在组织上。 河南油红染色原理
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