荧光基团:FITC:FITC是大面积使用的荧光基团,但其比较大的缺点是淬灭快,使用抗淬灭剂可以减轻。AMCA:常用在多标记实验中,如免疫荧光、流式细胞术。其缺点是,淬灭快,且由于肉眼不能很好的检测其所激发的蓝色荧光,因而AMCA耦联的二抗更适用于检测大量存在的抗原。花青染料(Cy2,Cy3,Cy5):Cy2比FITC更稳定,且在表面荧光显微镜下,Cy2的荧光FITC更强。Cy3和Cy5比大多数荧光基团更亮,更稳定,背景更弱。二者常在共聚焦显微实验中作多标记。但Cy5的缺点是不能用表面荧光显微镜观察,因此通常用具有远红外检测器的共聚焦显微镜观察。TRITC,RRX,TR:TRITC经常和FITC一起用于双标记实验中,也可以使用RRX或TR,但TR会产生较高的背景。在使用装有氪氢灯的激光共聚焦扫描显微镜作三标记实验时,RRX尤其有用,可以和Cy2(或FITC)及Cy5一起使用,因为RRX的发射波长在Cy2和Cy5中间,且和这两者的重叠很少。PE:常和FITC一起用于流式细胞术双标记实验。生物素:生物素(biotin)可以和***蛋白(avidin)发生不可逆反应而紧密结合在一起。首先加入生物素标记的二抗;在加入耦联有酶或荧光集团的avidin、ExtrAvidin或streptavidin,后者能够结合于二抗表面的多个位点上。 根据注入细菌或病毒的不同,以及注射到不同种类的动物体内,得到不同免疫性能的抗病毒血清抗体。河北proteintech抗体质量
分析样本中的蛋白质的结构性质;了解样本蛋白的结构性质有助于选择比较合适的抗体,至少两方面因素需要考虑待测祥本蛋白的结构域:抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中的**原包括:全长白。重白片断、多陆、全有机体(如:细菌)或细胞,抗体说朋书般都有免疫原的描述,如果打算检测的是重日片断或一种特殊的同型物或重白全长的某区域,则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FCM流式检测活细胞的表面蛋白,则需更选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。样本的提取或处理过程:某些抗体更样本经过某些特殊处理,例如:许够抗体只识别还原和变性的,表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本,另方面,某些抗体但识别天然折叠状态的重白。当选择免疫组化的抗体,应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织,而另些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织,这些都会在抗体书上应用部分标示出来。 辽宁abcam抗体哪里有其主要功能是与抗原结合后,有效地消除侵入机体内的微生物、寄生虫等异物。
四川扬克斯特为您介绍一抗的选择:检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体,需要考虑如下几种因素:
1、分析试验应用的类型l
2、样本蛋白的结构性质l
3、样本的种属l
4、抗体宿主的种类l
5、抗体的标记和检测l
分析试验应用的类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于WBIHCICCELASA分析等,如果抗体说明书没有提及的应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而*是说明尚未经过此种分析试验验证,如果抗体不适用某些分析试验,则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。2.样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择**合适的抗体,至少两方面因素需要考虑待测样本蛋白的结构域:抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中的免疫原包括:全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞,抗体说明书一般都有免疫原的描述,如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域,则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白,则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
首先抗体的选择:分析自己实验应用的实验方法是哪种?一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于WB、IHC、ICC、ELISA、FCM分析等。分析自己实验中标本的种属是哪种动物或人的?一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种动物或人的标本,如:可以用于rat、mouse、human、pig、goat等动物的标本的实验。也就是说应选择物种相同或有交叉反应的抗体,抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应,因其氨基酸序列同源性较高。 人源化抗体区域:抗体的恒定区部分,类别:嵌合抗体、改型抗体等,优点:减少异源抗体对机体的免疫副反应。
抗体规律:
(1)初次反应产生抗体:当抗原***次进入机体时,需经一定的潜伏期才能产生抗体,且抗体产生的量也不多,在体内维持的时间也较短。
(2)再次反应产生抗体:当相同抗原第二次进入机体后,开始时,由于原有抗体中的一部分与再次进入的抗原结合,可使原有抗体量略为降低。随后,抗体效价迅速大量增加,可比初次反应产生的多几倍到几十倍,在体内留存的时间亦较长。
(3)回忆反应产生抗体:由抗原刺激机体产生的抗体,经过一定时间后可逐渐消失。此时若再次接触抗原,可使已消失的抗体快速上升。如再次刺激机体的抗原与初次相同,则称为特异性回忆反应;若与初次反应不同,则称为非特异性回忆反应。非特异性回忆反应引起的抗体的上升是暂时性的,短时间内即很快下降。 一抗是在什么物种来源的,相应的二抗也要是抗该物种的抗体。江苏水生动物抗体二抗
***抗体就是能和非抗体性抗原特异性结合的蛋白。河北proteintech抗体质量
抗体功能区介绍:构成抗体单体分子的四条多肽链中,每条肽链又可被链内二硫键连接形成几个球形结构,并具有不同生物学功能,这些具有生物学功能的球型结构称为抗体的功能区。每条轻链有两个功能区(VL和CL)。IgG、lgD的H链有四个功能区(即VH、CH1、CH2、CH3);IgM和IgE重链有五个CH,即多一个功能区CH4。抗体同时有两个功能,抗体能中和病原体通过结合到其抗原,并阻止他们的行动,如防止病毒进入细胞,或阻断细菌***,抗体还可以调理破坏病原体,该过程通过标记病原体,使免疫系统的其他细胞可以识别。 河北proteintech抗体质量
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