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什么是限制性内切酶?限制性内切酶是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列,并由此切割DNA双链结构的核酸内切酶,有三种类型,Ⅰ类,Ⅱ类,Ⅲ类,他们都有甲基化修饰功能和限制酶功能,Ⅱ类常用于分子克隆常见的Ⅱ型限制性内切酶切割双链DNA后会产生末端或末端。南京英瀚斯生物科技有限公司,医学科研的增强子。一站式医学科研实验外包服务平台。专业为您承担该项检测业务,数据真实无重复,报告内容详尽。欢迎来电垂询。细胞实验外包。外包细胞实验可避免高额的设备投入和维护费用。江西细胞实验外包哪家靠谱

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RIP实验南京英瀚斯生物科技有限公司,医学科研的增强子。一站式医学科研外包服务平台。专业为您承担细胞实验外包,数据真实无重复,报告内容详尽。欢迎来电垂询。先用甲醛等试剂交联细胞内的“蛋白-RNA”互作复合物,裂解细胞后,用靶蛋白特异的抗体(或标签抗体)做免疫沉淀,获得“靶蛋白-RNA”互作复合物,去交联分离其中的RNA;针对预测的靶蛋白结合RNA的序列设计引物,做qPCR实验,验证预测的RNA是否与靶蛋白有结合;或者将分离出来的RNA做高通量测序,筛选到可能与靶蛋白结合的RNA。天津生物细胞实验外包公司细胞实验外包能帮助我们解决实验人手不足和设备资源紧张的问题。

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做RIP的时候和beads孵育的lysate的浓度如何确定?有些动物的文献提到用细胞板数细胞个数,想知道如果用蛋白浓度的话,大概在什么数量范围的蛋白总量对应50ulBEADS?细胞实验外包。50ulbeads对应的是一个reaction,而我们推荐一个reaction是100ul裂解上清(2×107cells加入100ulRIPlysisbuffer得到),所以只需要在裂解前计数一下,并按括号中的比例加入裂解buffer,后续100ul裂解上清就是一个reaction的蛋白用量。不建议通过裂解后测蛋白浓度的方法进行配比。医学细胞实验外包对样品有一定的要求。天津比较好的细胞实验外包公司

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因为RIP做完得到的是RNA序列,要做后续检测,比如测序、判断目标序列位置等,是不是都必须要做RT-PCR,得到逆转录的DNA后,后面就跟ChIP相同了?细胞实验外包。常见的用realtimeqRT-PCR。如果对照的目的是保证两个样品间加入的细胞量一致或者进行定量,理论上说,使用input作为判别,计算不同样品上样量的差异。如果对照的目的是为了看IgG以及目的抗体富集的非特异性mRNA的量的话,那么可以找一个确定不会与目的抗体结合的RN**段设计primer进行qPCR,用来看IgG以及目的抗体拉下来的背景情况。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用,但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物,RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同(如复合物不需要固定,RIP反应体系中的试剂和抗体相对不能含有RNA酶,抗体需经RIP实验验证等等)江西细胞实验外包哪家靠谱

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