时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)是FRET技术的升级版,它结合了FRET的高空间分辨率和时间分辨荧光(TRF)的长寿命信号优势。TR-FRET使用镧系元素螯合物(如铕Eu3+、铽Tb3+)作为供体。这类供体具有荧光寿命极长(微秒至毫秒级)的特点。检测时,使用脉冲光源激发后,在短暂延迟后(例如50-100微秒)再测量荧光,此时普通背景荧光(寿命只纳秒级)已完全衰减,而长寿命的供体荧光及其通过FRET转移产生的受体荧光(通常使用别藻蓝蛋白APC或d2等作为受体)则被特异性检测到。这一设计几乎完全消除了样本基质、微孔板及试剂本身的短寿命背景荧光干扰,将检测的信噪比和灵敏度提升至新的高度,特别适用于复杂生物样本(如血清、细胞裂解液)的直接检测。创新驱动未来!均相化学发光创新产品引导体外诊断新潮流!河南POCT产品均相发光与普通发光的区别

尽管优势明显,均相发光技术也存在一些挑战和局限性。首先,某些技术(如FRET)可能受到样本自身颜色(如血红蛋白)、浊度或某些化合物(如具有强荧光或淬灭特性的药物)的光学干扰。其次,均相检测通常对试剂的特异性和纯度要求极高,任何非特异性结合或聚集都可能导致假阳性信号。第三,开发均相检测方法需要进行复杂的探针设计和标记优化,前期开发成本较高。比较后,对于某些极低丰度的靶标,其灵敏度有时可能仍低于经过多步洗涤和信号放大的异相方法(如化学发光免疫分析CLIA)。湖南第五代化学发光均相发光解决方案均相化学发光与荧光免疫技术相比,优势在哪?

表面等离子体共振(SPR)是一种实时、无标记的生物分子相互作用分析技术,能提供结合动力学(kon, koff)和亲和力(KD)的精确数据。均相发光技术(如TR-FRET, Alpha)则是一种基于标记的高通量终点法或实时动力学检测。两者具有很好的互补性:SPR常用于前期的靶点-配体相互作用的详细表征和验证;而基于此验证过的相互作用对,开发出的均相发光检测方法,则可以用于后续的大规模化合物库筛选和功能学研究。将两者结合,构成了从机理研究到大规模筛选的完整工作流程。
除了基于荧光的能量转移,均相检测也可利用化学发光能量转移(CRET)。在CRET中,供体是化学发光反应(如鲁米诺-过氧化物酶反应)产生的激发态分子,其发出的光能直接激发邻近的荧光受体发出更长波长的光。通过设计使受体标记在结合事件的另一方,即可实现均相检测。电化学发光(ECL)也可用于均相模式。例如,将三联吡啶钌标记在一方,另一方标记上能够在其电极氧化还原循环中起共反应物作用的物质(如三丙胺)。当两者因生物识别事件靠近时,电化学触发的高效ECL反应得以发生,产生强信号。这些方法进一步拓展了均相发光的技术边界,提供了更多样化的信号输出选择。25-羟基维生素D(25 OH-VD)检测试剂盒(均相化学发光法)。

外泌体等细胞外囊泡(EVs)是疾病诊断的潜在生物标志物来源。其分离和表征通常繁琐。均相化学发光技术提供了快速分析方案。利用EVs表面普遍或特异性表达的膜蛋白(如CD9、CD63、CD81或相关抗原),将针对不同蛋白的抗体分别偶联Alpha供体珠和受体珠。当EVs存在时,多个抗体结合到同一个EV上,拉近微珠产光信号,从而实现EVs的定量。通过使用不同抗体组合,还可以对EVs进行亚群分型分析。这种方法无需超速离心,操作简单,有望用于临床样本的快速筛查。降本增效新方案,为您节省实验成本!广东体外诊断均相发光临床检验医学中的应用研究
浦光生物均相化学发光新技术!河南POCT产品均相发光与普通发光的区别
研究蛋白-蛋白相互作用(PPI)对于理解细胞信号网络至关重要。传统的酵母双杂交、免疫共沉淀等方法操作复杂、通量低。以Alpha技术为表示的均相发光方法彻底改变了这一局面。将靶蛋白A与供体珠偶联,互作蛋白B与受体珠偶联。当A和B在溶液中相互作用时,拉近两珠产生信号。该方法可在纯化蛋白、细胞裂解液甚至活细胞培养基中进行,不只能验证已知互作,更能用于高通量筛选破坏或促进特定PPI的小分子化合物。其均相特性使得可以实时监测互作动力学,研究互作强度,为药物发现和基础生物学提供了强大工具。河南POCT产品均相发光与普通发光的区别
相较于荧光或比色法,化学发光作为均相检测的信号系统具有多重独特优势。首先,它无需外部激发光源,从而完全避免了光源不稳定、样本自发荧光及光散射所带来的背景干扰,理论上能获得极高的信噪比和灵敏度。其次,化学发光反应产生的光子信号强度在一定范围内与反应物浓度直接相关,动态范围宽,可跨越数个数量级。再者,化学发光体系(如鲁米诺、吖啶酯)的反应动力学多样,可满足从快速闪光到持久辉光的不同检测需求。比较后,化学发光反应的启动通常由单一试剂(如过氧化氢、碱)触发,易于控制,非常适合自动化仪器上的顺序注射和即时读数。这些特性使其成为实现超灵敏、高稳健性均相检测的理想信号输出模式。均相化学发光在疾病早期筛查中能...