表面等离子体共振(SPR)是一种实时、无标记的生物分子相互作用分析技术,能提供结合动力学(kon, koff)和亲和力(KD)的精确数据。均相发光技术(如TR-FRET, Alpha)则是一种基于标记的高通量终点法或实时动力学检测。两者具有很好的互补性:SPR常用于前期的靶点-配体相互作用的详细表征和验证;而基于此验证过的相互作用对,开发出的均相发光检测方法,则可以用于后续的大规模化合物库筛选和功能学研究。将两者结合,构成了从机理研究到大规模筛选的完整工作流程。均相化学发光在体外诊断领域的应用范围有多广?上海干式化学发光均相发光解决方案

在生物制药(如单克隆抗体、重组蛋白)的生产过程中,均相发光技术被普遍用于工艺开发和质量控制。例如,使用基于Protein A或抗原的均相免疫分析,快速定量细胞培养上清或纯化过程中的抗体滴度。也可以使用针对特定宿主细胞蛋白(HCP)或Protein A残留的均相检测方法,监测纯化工艺的去除效率。此外,对于抗体药物的生物学活性(如ADCC、CDC效应),也有相应的基于细胞报告的均相发光检测方法。这些应用帮助实现了生物工艺的快速优化和产品质量的严格监控。体外诊断均相发光POCT市场新机遇,浦光干式均相化学发光助您把握未来!

激酶是重要的药物靶点,其活性检测是药物筛选的关键。均相发光技术,尤其是TR-FRET和Alpha技术,为此提供了理想平台。以TR-FRET为例:将待测激酶、底物肽、ATP与待筛选化合物共同孵育。体系中包含两种抗体,一种针对磷酸化底物(带供体标记),另一种针对底物肽的标签(带受体标记)。只有当激酶活性正常,底物被磷酸化后,两个抗体才能同时结合到底物肽上,使供受体靠近产生FRET信号。若化合物能抑制激酶,则磷酸化水平下降,FRET信号减弱。这种方法无需分离,可直接在含有ATP、激酶和化合物的混合液中实时或终点法检测,通量极高,是发现激酶抑制剂的主流手段。
GPCR是比较大的药物靶点家族,其功能研究涉及配体结合、第二信使产生、下游信号通路活化等多个层面。均相发光技术多方面渗透于此领域。对于配体结合竞争实验,可采用TR-FRET,将受体标记供体,配体标记受体。对于GPCR活化后比较关键的cAMP积累或IP3/DAG产生,均有成熟的均相检测试剂盒。例如,cAMP检测常采用基于抗体竞争原理的均相发光免疫分析。细胞裂解后,内源性cAMP与加入的标记cAMP竞争结合有限量的抗cAMP抗体。抗体结合事件通过FRET或Alpha技术被检测,信号强度与内源性cAMP浓度成反比。这类方法直接在细胞裂解液中进行,快速、灵敏,完美契合GPCR激动剂/拮抗剂的高通量筛选。均相化学发光与荧光免疫技术相比,优势在哪?

荧光共振能量转移(FRET)是均相发光技术中应用比较多方面的信号产生机制之一。其原理是:当一个荧光基团(供体,Donor)的发射光谱与另一个荧光基团或淬灭基团(受体,Acceptor)的吸收光谱有足够重叠,且两者距离非常接近(通常1-10纳米)时,供体的激发态能量会以非辐射方式转移给受体。在均相检测中,常将供体和受体分别标记在相互作用的生物分子对(如一对抗体、或酶与底物肽)上。当目标分子存在并促使这对生物分子结合时,供体与受体被拉近,发生有效的FRET,导致供体荧光淬灭,受体荧光增强(如果受体是荧光团)。通过监测供体与受体荧光强度的比率变化,即可高灵敏度、高特异性地定量目标分析物。均相化学发光在疾病早期筛查中能发挥怎样的作用?江苏第五代化学发光均相发光免疫分析
均相化学发光在自身免疫性疾病诊断中的作用大吗?上海干式化学发光均相发光解决方案
化学发光共振能量转移(CRET)是另一种重要的均相信号产生机制。它本质上是一种无需外部光激发的内源性FRET。在CRET中,供体是化学发光反应产生的激发态分子(如氧化的鲁米诺或吖啶酯),其发射的光子能量直接传递给邻近的荧光受体(如荧光染料、量子点或纳米材料),促使受体发射出波长红移的荧光。在均相检测设计中,可将化学发光分子与受体分别标记在相互作用的生物分子对上。只有当目标分子存在并促使两者结合时,供体与受体才能充分靠近,发生有效的CRET,产生特征性的受体荧光信号。通过检测受体荧光,可以避免直接化学发光可能存在的背景干扰,并获得更佳的光谱分辨能力,利于多重检测。上海干式化学发光均相发光解决方案
适配体是通过SELEX技术筛选得到的单链DNA或RNA分子,能高亲和力、高特异性结合靶标。将适配体与均相发光技术结合,产生了新型生物传感器。例如,可以设计一个分子信标式适配体:其两端分别标记荧光供体和淬灭基团,在没有靶标时结构闭合,FRET发生,信号淬灭;结合靶标后构象打开,荧光恢复。或者,将适配体与发光酶(如荧光素酶)融合,靶标结合引起构象变化,从而活化或抑制酶活性。这类均相适配体传感器在生物小分子、离子甚至细胞检测中展现出巨大潜力。均相发光技术研究进展,浦光生物为您提供前沿资讯!浙江诊断试剂均相发光免疫诊断试剂研究蛋白质-蛋白质、蛋白质-核酸等生物分子间的相互作用,对于理解生命过程至关重要...