样本处理、核酸提取、PCR扩增和数据处理是PCR的四个步骤。其中核酸提取可以帮助研究人员准确地快速地分离细胞或分子材料中的有效核酸,并获得足够的样本为后续实验提供依据。无论是病毒、细菌还是体细胞,遗传物质都不是裸露在细胞外,都是在细胞内。需要有一个核酸提取试剂将遗传物质释放到外界,保证PCR反应效率。将核酸释放出来后,提取与纯化过程中同样需要将样本中的一些PCR抑制物去除掉,获得纯度比较高的核酸,比较大限度的保证PCR反应中抑制物的浓度降低,提高核酸检测的准确性。因此核酸提取与纯化这一步,也是保证PCR反应结果的关键一步。巧亦捷核酸检测一体机采用磁珠法提取,效率高且可确保结果更准确。巧亦捷核酸检测解决方案包括全自动便携式核酸检测一体机、免核酸提取检测试剂盒。动物用PCR检查
巧亦捷核酸一体机采用的探针法荧光PCR与常规PCR的不同之处在于:在上、下游引物外还加入了具有序列特异性的探针(探针本身具有荧光标记),该探针根据需要扩增的靶序列设计因此只能与待检测序列结合,与染料法相比提高了实验的特异性。目前市场上的探针主要种类有:TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等,其中以TaqMan探针应用宽泛。TaqMan探针的结构:长度与普通PCR引物类似,大约20bp左右。在5’与3’端各标记有一个荧光基团,5’的荧光基团称为报告基团(Report),3’的荧光基团称为淬灭基团(Quencher)。TaqMan探针的性能:在探针结构完整的情况下用特定的波长激发报告基团,由于报告基团与淬灭基团的空间位置很近,因此报告基团能够通过FRET(FluorescenceResonanceEnergyTransfer)将接受的能量转移到淬灭基团,使后者以发射荧光或热量的方式释放能量,而报告基团并不发射特定波长的荧光信号。江苏动物疫病PCR仪器巧亦捷使用的PCR扩增酶酶活是同类酶的3倍以上,检测灵敏度高。
PCR检测技术以灵敏度高,稳定性强为优势深受兽医师的青睐,以常见的猫传腹为例:猫传腹是由猫肠冠状病毒的突变引起。猫传腹为分干性和湿性两种。如果不用PCR技术的话,干性和湿性传腹均不好确诊。但如果采用PCR技术,抽取患猫腹腔或胸腔积液进行检测,约45分钟就可以确诊是否是湿性猫传腹。而针对于干性传腹,大多数病猫会呈现淋巴结肿大。所以也可以通过PCR技术检测淋巴结的穿刺液来确诊。PCR技术在猫传腹方面的应用极大缩短了确诊的时间,从而争取到更多的诊疗时间,患猫生存的机会也就更大。巧亦捷核酸一体机的检测项目范围很广,像猫瘟、猫鼻气管炎、猫上呼吸道的各类症状、犬流感、犬瘟、犬细小、犬呼吸道和肠道的疾病、狂犬病等多种疾病均可以快速确诊,为诊疗争取了更多的时间。
巧亦捷(ingeNova)是翊新诊断技术(苏州)有限公司旗下专注于动物体外诊断检测的产品品牌,以翊新诊断全资子公司——苏州翊创生物科技有限公司为主体。巧亦捷系列产品覆盖了猫呼吸道疫病检测、猫消化道疫病检测、犬消化道疫病检测、寄生虫等宠物核酸检测,非洲猪瘟、蓝耳等猪病核酸检测,牛逼支、牛腹泻等牛羊类食品动物的核酸检测,人畜共患病核酸检测,以及鱼虾等水生动物的核酸检测。全自动薄膜微流控核酸检测一体机是巧亦捷系列产品的主打检测平台,巧亦捷基于此平台技术致力于为客户提供快速、精确的动物疫病诊断整体解决方案。依托先进的薄膜微流控技术开发一体化、智能化的快速、便捷的POCT体外分子诊断解决方案。针对动物疫病的早期诊断,公司以市场需求为出发点,开发出了低成本、无污染、能够实现真正意义上“全自动,全封闭,样本进,结果出”的薄膜微流控芯片技术和可以用于动物疫病现场快速诊断的分子检测系统,从而为动物疫病的现场诊断提供更加便利的检测手段。目前已开发非洲猪瘟检测、宠物呼吸道多联检测、宠物消化道多联检测等多种试剂及检测方案。其实PCR在技术上仍有突破空间,巧亦捷核酸检测一体机已可以实现多重检测。
巧亦捷核酸一体机采用的TaqMan探针法介绍:TaqMan探针法是具有高度特异性的定量PCR技术。它的工作原理是在PCR反应体系中存在一对PCR引物和一条探针,探针的5′端标记有报告基团,3′端标记有荧光淬灭基团,探针只与模板特异结合,其结合位点在两条引物之间。当探针完整的时候,报告基团的荧光能量被淬灭基团吸收,所以仪器搜集不到信号,随着反应的进展,Taq酶遇到探针,利用3′→5′外切核酸酶的活性把探针切断,导致报告基团的荧光能量不能被淬灭基团吸收,产生了荧光信号,因此信号的强度就代、表了模板DNA的拷贝数。PCR检测正越来越多的被动物临床医师所接受,并广泛应用于动物临床疾病诊断。江苏动物用PCR技术
PCR在常见传染病、**、遗传病、寄生虫病、优生优育、法医学等领域中有相当高的实际应用价值。动物用PCR检查
大多数宠物医院运用的诊断方法为:PCR和试纸条。其区别是:试纸条原理是基于抗体抗原的免疫学方法,通过颜色或荧光标记来判读,和PCR检测是基于不同方法学的检测方式。PCR通过检测样本中有无病毒DNA(RNA)来确诊,灵敏度高、特异性强、支持检测项目多,是人医医学界公认的诊断金标准,两者区别可以理解为滴血认亲(免疫学方法)与亲子鉴定(分子诊断)的区别。目前专业的的宠物疾病机构就是使用PCR检测。巧亦捷核酸检测一体机采用国际**的薄膜微流控技术,实现了从核酸提取、PCR扩增、荧光检测全流程自动化芯片内完成,可以实现专业实验室级别的核酸检测,且检测时间短,全程无需专业技术人员参与,可实现基于病症的多项目联检,更适合宠物医院、兽医站、养殖场等现场快检应用场景。动物用PCR检查