企业商机
免疫沉淀基本参数
  • 品牌
  • 世途科生物
  • 产品名称
  • 免疫沉淀磁珠Protein A/G
  • 有效期
  • 12个月
免疫沉淀企业商机

免疫沉淀技术的实验方法通常包括以下步骤:
1. 样本准备
2. 细胞裂解:使用裂解缓冲液(含有蛋白酶抑制剂以防止蛋白质降解)裂解细胞,释放蛋白质。
3. 蛋白质浓度测定:使用BCA、Bradford或Lowry等方法测定裂解液中蛋白质的浓度。
4. 抗体预处理:如果使用预固定的抗体,需先将抗体固定在固相支持物上,如琼脂糖珠或磁性微珠。
5. 免疫沉淀反应:将裂解液与特异性抗体(固定或未固定)混合,并在4°C下缓慢摇晃孵育过夜,以允许抗体与目标蛋白质充分结合。
6. 固相支持物的回收:对于未固定的抗体,加入与抗体特异性结合的蛋白A或蛋白G结合的固相支持物。
7. 洗涤:去除未结合的蛋白质和杂质,通常需要多次洗涤固相支持物。
8. 洗脱:使用适当的洗脱缓冲液(如加热的SDS加载缓冲液或酸性缓冲液)从固相支持物上洗脱免疫复合物。
9. 后续分析:对洗脱的蛋白质进行SDS-PAGE电泳、Western Blot、质谱分析等,以进一步分析目标蛋白质。
10. 对照实验:包括正对照(已知能沉淀目标蛋白的抗体)和负对照(非特异性抗体或无抗体)以验证实验的特异性。
免疫沉淀纯化所得抗原量低是什么原因?南京ChIP免疫沉淀磁珠应用

免疫沉淀RIP实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。
琼脂糖珠海绵状的结构  (直径 50-150 μm)  可以结合抗体  (继而结合靶蛋白) ,它能够直接高效、快速结合抗体,而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构,这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触,具有更高的结合载量。
与琼脂糖珠不同,磁珠是固体,抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠 ,尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力,但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多,使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。
简而言之,琼脂糖珠的结合能力较强,而磁珠在得率,可重复性以及自动化方面有明显的优势。
杭州anti Flag免疫沉淀选磁珠还是琼脂糖珠免疫沉淀技术RIP的优缺点是什么?

免疫沉淀作为一种精细的生物技术工具,在深入探究生物分子的特性和功能方面展现出了独特的优势。在研究蛋白质的构象变化方面,免疫沉淀发挥着重要作用。蛋白质的构象决定了其功能,而某些外界因素或生理过程可能导致蛋白质构象的改变。通过免疫沉淀特定状态下的蛋白质,并结合结构分析技术,如X射线晶体衍射或核磁共振,能够精确地解析蛋白质构象的变化,进而揭示其功能调节的机制。对于蛋白质与核酸的相互作用研究,免疫沉淀也是一种有效的手段。例如,在基因转录过程中,转录因子与DNA的结合对于调控基因表达至关重要。通过免疫沉淀特定的转录因子,可以同时沉淀与其结合的DNA片段,从而确定转录因子在基因组上的结合位点,揭示基因转录调控的分子机制。此外,免疫沉淀在研究蛋白质的泛素化修饰方面具有重要应用。泛素化修饰是一种重要的蛋白质翻译后修饰,参与了许多细胞过程的调控。通过免疫沉淀泛素化的蛋白质,可以解析其泛素化位点和修饰模式,深入了解泛素化在蛋白质降解、信号转导等过程中的作用。

免疫沉淀技术作为现物学研究中的重要工具,为揭示细胞内复杂的生物分子相互作用提供了关键的方法。该技术的重点原理是基于抗原与抗体的特异性结合。通过使用特异性的抗体,能够从细胞裂解液或复杂的生物样本中捕获目标蛋白质及其与之相互作用的分子复合物。这种特异性的捕获使得我们能够分离和研究那些在细胞内原本难以捉摸的蛋白质相互作用。在研究蛋白质-蛋白质相互作用方面,免疫沉淀技术发挥着不可替代的作用。它可以帮助确定在特定生理或病理条件下,哪些蛋白质会形成复合物共同发挥功能。这对于理解细胞信号转导通路、基因表达调控以及疾病的发生机制具有重要意义。此外,免疫沉淀技术还能够用于研究蛋白质的翻译后修饰,如磷酸化、甲基化等。通过特异性抗体识别修饰后的蛋白质,进而分析其修饰状态和相关的相互作用,为深入探究蛋白质的功能调控提供了有力的支持。免疫沉淀技术IP的实验设计。

免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)是一种用于研究蛋白质相互作用、蛋白质复合物组成以及特定蛋白质的表达和纯化的实验技术。
基本原理
免疫沉淀技术基于抗体与特定蛋白质(抗原)之间的特异性相互作用。通过使用针对目标蛋白质的特异性抗体,可以从含有多种蛋白质的复杂样本中捕获并富集目标蛋白质。
免疫沉淀技术有多种类型,包括:
1. 个别免疫沉淀法(Individual IP)
2. 免疫共沉淀法(Co-IP)
3. 染色质免疫沉淀法(ChIP)
4. RNA免疫沉淀法(RIP)
近年来,免疫沉淀技术在固相支持物的选择上有了很大进步。磁性微珠因其操作简便、快速和自动化程度高而逐渐取代了传统的琼脂糖树脂。
免疫沉淀技术的综述。南京蛋白免疫沉淀选磁珠还是琼脂糖珠

免疫沉淀技术IP的应用有哪些?南京ChIP免疫沉淀磁珠应用

Co-IP(免疫共沉淀)技术主要用于研究蛋白质之间的相互作用,其应用场景如下:
1. 蛋白质相互作用网络的鉴定:Co-IP可用于构建蛋白质相互作用网络,发现目标蛋白的结合伙伴。
2. 信号传导途径的研究:通过Co-IP技术,科学家们发现了许多关键的细胞信号通路,如MAPK和PI3K/Akt通路等,为深入理解这些通路的功能和调控机制提供了重要线索。
3. 药物靶点筛选:利用Co-IP技术,研究人员可以筛选潜在的药物靶点。
疾病机制研究:通过分析疾病相关蛋白质的相互作用,Co-IP有助于揭示疾病的分子机制。
4. 抗体药物开发:Co-IP可用于研究抗体药物与其靶标蛋白的结合特性,评估抗体药物的亲和力和特异性。
5. 转录因子研究:Co-IP技术可以用于研究转录因子与蛋白质的相互作用,进而揭示基因调控网络。
南京ChIP免疫沉淀磁珠应用

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