PCR基本参数
  • 品牌
  • 巧亦捷,ingenova,翊新诊断,翊创生物,AccordQ
  • 型号
  • AQ1132
PCR企业商机

PCR(PolymeraseChainReaction)是一种复制核酸片段并提高DNA产量的技术,即所谓的聚合酶链式反应,这种技术可以在数小时内大量复制特定的基因片段。由于其高敏感性和高特异性的特点,PCR技术被应用在宠物疾病分子的诊断上,将从疑似患病宠物(血液、眼鼻分泌物、粪便,尿液或腹水)中采样的极微量病原(细菌、病毒或寄生虫)特定核酸片段样本,透过PCR的方式大量被复制,再以核酸电泳的方式判读结果,从而获得早期、快速、稳定和准确的诊断结果.国外已将PCR技术广泛应用于犬瘟、犬细小、弓形虫等致病菌的检测,从根本上突破了免疫学间接检测的局限。猪病诊断PCR检测方法

PCR的工作原理:在TaqDNA聚合酶(热稳定DNA聚合酶)的作用下,由一对特异性引物经热变性-退火-延伸反应,三个不同温度的循环处理使得DNA由少量扩增到多量的一种体外DNA扩增技术。在反应体系内,以一对人工合成的寡核苷酸作为扩增引物,第一步,模板DNA变性,以构成脱氧核糖核酸的四种脱氧核苷酸为底物,目的基因作为模板,在DNA聚合酶的作用下模板DNA经过80-90℃高温变性,使模板DNA双链经PCR扩增形成的双链解离成单链。第二步,模板DNA与引物退火(复性),模板DNA解离成单链后温度降至50-60℃,引物与模板DNA单链互补配对。第三步,引物的延伸,DNA模板-引物结合物在DNA聚合酶作用下,70-75℃以dNTP为反应原料半保留复制合成一条新的模板DNA链。这三个步骤为一个循环,2-4分钟即可完成一个循环,2-3小时就能使极微量的DNA、片段、甚至单拷贝基因复制到几百万倍,从而实现对靶DNA的放大。由于扩增碱基序列按照靶DNA复制,因此PCR反应具有高度特异性。快速PCR仪器传染病是由某些具有致病性的微生物,如细菌、病毒等引起的,能够在某种动物或多种动物之间传播的一些疾病。

巧亦捷推出的全自动薄膜微流控快速核酸检测一体机采用PCR荧光探针技术、通过大量临床病例验证,准确率高达99%,可以针对犬猫等宠物、畜禽动物、水产养殖动物等常见的传染病进行快速、准确的核酸检测,具有检测速度快、灵敏度高、特异性强的特点,可以在动物患病早期未表现出明显症状时及时进行准确判断,有效杜绝漏检、误诊的风险,帮助兽医师们对动物疾病诊断实现早发现、早诊断、早诊疗、早康复,以减轻它们的痛苦,尽早恢复健康。

现如今,大多数宠物医院还是使用胶体金方法对宠物疾病病原体进行检测,而此种检测方法准确性低,灵敏度不高,通常出现检测结果不准确而导致宠物误诊。如果是误诊,宠物则无法得到很好的诊疗,甚至会死亡。巧亦捷在宠物病原体核酸检测试剂系列中应用了PCR-荧光探针法,在PCR反应体系中加入特异的荧光探针,在实验条件下对宠物病原体特异性基因片段进行扩增,根据荧光强度的变化进行检测,并针对各种样品进行了反应体系的优化,灵敏度可达1000个拷贝,具防污染功能,特别适合在宠物医院使用。本产品操作简便,简单培训即可掌握操作方法。巧亦捷希望能更好的去为每一只动物提供专业的检测服务。

巧亦捷核酸一体机采用的探针法荧光PCR与常规PCR的不同之处在于:在上、下游引物外还加入了具有序列特异性的探针(探针本身具有荧光标记),该探针根据需要扩增的靶序列设计因此只能与待检测序列结合,与染料法相比提高了实验的特异性。目前市场上的探针主要种类有:TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等,其中以TaqMan探针应用宽泛。TaqMan探针的结构:长度与普通PCR引物类似,大约20bp左右。在5’与3’端各标记有一个荧光基团,5’的荧光基团称为报告基团(Report),3’的荧光基团称为淬灭基团(Quencher)。TaqMan探针的性能:在探针结构完整的情况下用特定的波长激发报告基团,由于报告基团与淬灭基团的空间位置很近,因此报告基团能够通过FRET(FluorescenceResonanceEnergyTransfer)将接受的能量转移到淬灭基团,使后者以发射荧光或热量的方式释放能量,而报告基团并不发射特定波长的荧光信号。巧亦捷致力于为动物健康保驾护航。江苏结核PCR技术在动物疫病检测的应用

分子诊断技术大致划分为PCR技术、分子杂交、基因测序、核酸质谱、生物芯片5大类。猪病诊断PCR检测方法

巧亦捷核酸一体机采用的TaqMan探针法介绍:TaqMan探针法是具有高度特异性的定量PCR技术。它的工作原理是在PCR反应体系中存在一对PCR引物和一条探针,探针的5′端标记有报告基团,3′端标记有荧光淬灭基团,探针只与模板特异结合,其结合位点在两条引物之间。当探针完整的时候,报告基团的荧光能量被淬灭基团吸收,所以仪器搜集不到信号,随着反应的进展,Taq酶遇到探针,利用3′→5′外切核酸酶的活性把探针切断,导致报告基团的荧光能量不能被淬灭基团吸收,产生了荧光信号,因此信号的强度就代、表了模板DNA的拷贝数。猪病诊断PCR检测方法

与PCR相关的**
信息来源于互联网 本站不为信息真实性负责