抗原与抗体的制备
抗体的制备
单克隆抗体和多克隆抗体:单克隆抗体(McAb)用杂交瘤技术制备(详见第三章),其特点:特异性好,亲和力高,只识别一个表位。多克隆抗体(polyclonal antibodies)存在于免疫动物的血清中,可通过直接分离血清获得,主要应用于免疫学诊断。也可经中性盐析和层析法进一步提出单一类别的免疫球蛋白(多为IgG),使诊断及各种研究在更精确的水平上进行。优点:可识别多个表位,缺点:特异性差,易出现交叉反应,亲和力低,通过其他抗原的吸收可获得针对单个抗原决定簇的单价因子血清。嵌合抗体和噬菌体抗体等基因工程抗体制备详见第三章。 含光微纳的微流控产品以其优良的性价比在市场上脱颖而出,为客户提供高质量的解决方案。云南驱动方式微流控产品技术
微流控驱动方式之声表面波驱动:表面声波:声波诱导固液界面的液流,导致液滴的移动。
Surface acoustic waves 表面声波特点:暴露在空气环境中的液滴放置在疏水表面上,微流体操作单元主要由声波控制的运动模块组成通过声呐实现,液滴的形成、运输和混合大多是可以自由编程的
原理:作为电湿润的替代方法,使用振幅为纳米级别的声波声波由置入电极中的压电转换芯片例如石英形成芯片疏水面的液滴可以在声波的影响下运动
操作单元测量:由疏水面的测量点完成,液滴经过测量点时一部分液体被留在测量点中进行测量混合:是SAW平台的内在操作单元在声波的影响下液体内部一直在发生循环进而混合
Surfaceacousticwaves表面声波应用PCR:由SAW、加热装置组成的PCR仪用于200nL的液滴中的DNR的PCR,为防止液滴的蒸发,在液滴表面覆一层不相溶的油滴,测量DNA的敏感性达到0.1ng
优点:能够自由的操作小的液滴更灵活,控制速度可根据液滴的表面张力调节
缺点:电极位置固定,可程控性差长期的稳定性差芯片界面制作难,费用高 浙江品质高微流控产品定制这些微流控产品经过精密加工,能够实现高精度的流体操控和精确的实验控制。
di yi节检测抗原抗体的体外方法
抗原抗体反应的特点
抗原抗体结合的比例性与结合物的可见性抗原与抗体的结合能否出现肉眼可见的反应,取决于两者的比例。若比例合适,则可形成大的抗原抗体结合物,出现肉眼可见反应现象;反之,虽能形成结合物,但体积小,肉眼不可见。由于这种分子比例的差异,分别形成了三种区带现象。等价带表示抗原与抗体比例蕞合适,形成大而多的结合物,此时在反应体系中测不出或有极少游离的抗原或抗体;抗体过剩带(前带)和抗原过剩带(后带)皆表示抗原与抗体的比例不合适,所形成的结合物少且小,其反应体系中存在着游离的抗原或抗体。小分子可溶性抗原,因其表面积大,容易导致后带现象;而细胞等颗粒性抗原,在与抗体反应时则易出现前带现象。因此在抗原抗体检测中,为能得到肉眼可见的反应,在了解抗原的物理性状之后,对抗原或抗体进行稀释,以调整二者的比例。
抗原抗体反应的阶段性抗原抗体反应可分为两个阶段。第一阶段是抗原抗体的特异结合阶段,此阶段jin需几秒到几分钟、尚无可见反应;第二阶段为可见反应阶段,需数分钟、数小时乃至数日,受各种因素影响。
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多聚酶链反应:多聚酶链反应(polymerasechainreaction,PCR)又称体外核酸扩增技术,即对特定DNA的片段进行非细胞依赖性扩增,其基本过程是将已提取的待测DNA在一对寡核苷酸引物、三磷酸核苷及耐热DNA多聚酶存在的情况下,分别于90℃、55℃和72℃下经变性、退火和核苷酸链的延伸,如此循环数十次以扩增DNA。扩增物经溴乙锭染色后作凝胶电泳,再于紫外灯下观察特定碱基对数的DNA的片段,以出现橙红色的电泳带为阳性。若需进一步鉴定,可将凝胶分离的DNA回收再用特异性探针进行杂交分析。PCR在免疫学中通常应用于ai基因、凋亡相关基因的表达、HLA的定型与基因分析、免疫球蛋白和T细胞受体多样性研究以及细胞因子、粘附分子的检测。PCR的方法有30余种,如多重PCR、巢式PCR、二次PCR、共享引物PCR、逆转录PCR、锚定PCR等等。现临床研究蕞常用的是逆转录PCR,现简介如下:首先提取细胞总RNA,然后在逆转录酶的作用下,以mRNA为模板合成cDNA,随后加入特异性引物进行扩增,再经琼脂糖电泳检测特异性的DNA,从而反映出某种基因的转录状况。云南驱动方式微流控产品技术