抗原与抗体的制备
抗原与抗体是血清学反应的物质基础。抗原的制备与纯化是获得特异性抗体的先决条件,所得到的抗体又可反过来纯化和检测抗原。
抗原的制备抗原种类繁多,按其物理性状可分颗粒性和可溶性两类。前者指细胞性抗原(包括细菌抗原),其制备较为简便,一般用新鲜细胞以无菌生理盐水或磷酸缓冲液洗涤后配成一定浓度。若系细菌抗原,则取新鲜培养物,经集菌作如下处理,H抗原因不耐热用0.3%~0.5%甲醛处理,O抗原耐热可加热100℃2h去除H抗原后应用。可溶性抗原可以是细胞膜、细胞浆、细胞核及核膜等细胞组成部分,也可能是经细胞分泌至体液中的一些可溶性因子。细胞组成部分常需经过机械或酶解法等破碎、离心获得粗制抗原,并通过选择性沉淀或层析等方法进一步纯化。而体液中(如血清等)的可溶性抗原则可直接用生化手段获得所需成分。有些可溶性抗原jin具有免疫反应性,而无免疫原性,此类抗原尚需与载体偶联方可成为完全抗原。 苏州含光微纳的微流控产品是一项创新技术,通过微细通道实现精确流体控制,为实验室提供了全新的解决方案。广东医用微流控产品质量
微流控驱动方式之电驱动:特点:在动电平台中,微流体操作单元通过电场对带点微粒的控制实现包含了电渗流、电泳、双向电泳、极性叠加等
原理蕞早的应用是毛细管中电泳分离进行化学分析
操作单元:在带不同电的两个电极板中间,带点例子会偏向其中一方;低至皮升级别的液体体积测量;电泳:实现连续的分离双向电泳用于细胞分离、生物分子、基因转染等电渗流实现液体驱动
应用:分析化学领域第1个用于微量分析的体系是毛细管电泳技术CapilarLifeSciences,AgilentTech提供DNA和蛋白质检测的微流体芯片,几分钟之内完成微流体整合电泳和微阵列的结合,速度提高了20倍,DNA与微阵列结合更高效
优点:电渗流实现了不需要移动部分就能完成的无脉冲泵无泰勒扩散,提高有效分离率更快的散热、溶解、分离和电泳的无缝整合
缺点:由于电泳本身带来的pH梯度液体流动可能和外界电场方向chong tu,点解可能产生前票设置大量平行检测障碍大 辽宁诊断平台微流控产品质量这些微流控产品经过精密加工,能够提供高精度的流体控制和精确的实验控制。
分子诊断主要技术发展的时间轴早期的分子诊断设备,多为大型集成化设备,包含很多的操作模块。在原理上,早期的设备并无很多创新,主要是将多种手工操作内容自动化和集成化,发展到基因芯片,才有了原理性的突破。1990年提出的人类基因组计划、后来的蛋白组学以及从近期开始的微生物组计划,极大的推动了分子诊断设备的发展。产品方面,较早期时有Affymetrix公司推出的di yi块商业化基因芯片。接下来是PCR仪器的发展。早期的PCR仪器,是简单的DNA解链、复制、复性等过程,除了水浴锅自动化,并没有太多技术含量。数字PCR技术出现后,与生物信息学和微型加工技术关联起来,发展速度很快。再后来出现了微流控技术和基因测序技术。基因测序技术经历了一代、二代、三代,目前测序技术,仍然是重要的发展方向。
分子诊断的三大检测平台分子诊断主要的检测平台为PCR仪、芯片系统以及基因测序平台。PCR仪——数字PCR是未来发展趋势分子诊断设备另一个重要的组成内容是PCR仪器。常规的PCR目前技术上可提升的空间很有限,但很多部件只有少数几家厂家做的不错。荧光定量PCR,国内有很多厂家生产,技术、元器件等各方面正在迅速赶超国外仪器厂商水平,但这未必是国内厂商蕞终的发展方向。得益于光源及检测器件小型化趋势,现在的荧光PCR仪越来越小型化。数字PCR是PCR领域未来发展的趋势,目前有一些厂商在研究生产,比如锐讯生物、新羿生物、领航基因等。现在数字PCR的售价很高,主要原因是后端检测器件灵敏度要求高,成像器件技术先进,造成成本偏高。当然,因为数字PCR有jue dui定量的功能,对于分子检测意义重微流控技术的应用广,可用于生物医学研究、药物筛选、环境监测等领域,为科研人员提供了更多实验选择。
di yi节检测抗原抗体的体外方法
抗原抗体反应的特点:
抗原抗体结合的特异性抗原借助表面的抗原决定簇与抗体分子超变区在空间构型上的互补,发生特异性结合。同一抗原分子可具有多种不同的抗原决定簇,若两种不同的抗原分子具有一个或多个相同的抗原决定簇,则与抗体反应时可出现交叉反应(cross reaction)。
抗原抗体结合的可逆性抗原抗体结合除以空间构型互补外,主要以氢键、静电引力、范德华力和疏水键等分子表面的非共价方式结合,结合后形成的复合物在一定条件下可发生解离,回复抗原抗体的游离状态。解离后的抗原和抗体仍保持原有的性质。抗原抗体复合物解离度在很大程度上取决于特异性抗体超变区与相应抗原决定簇三维空间构型的互补程度,互补程度越高,分子间距越小,作用力越大,两者结合越牢固,不易解离;反之,则容易发生解离。 微流控技术的应用可以实现高通量实验,加快科研进程,提高研究效率。广东医用微流控产品质量
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微流控:驱动方式之 液体流动的特点•遵循低雷诺数流动的规律。除了组分间的扩散,两层或者多层流体可以相邻流动而不互相混合,使得样品的混合变得困难。液体流动的控制:1,由于比表面积增大,表面张力、摩擦力的影响非常明显。2,微通道中的液液界面与通道壁平行,因为表面张力和摩擦力大于重力。3,液体的物理性质发生变化,如表观粘度变大4,纯水通过微通道的时间:理论值2.3ms实验值10ms 5,层流装置的接合点:三股不同来源的流动液体在交汇点对称性汇合,形成层流。广东医用微流控产品质量