下面将结合实施例对本发明作进一步说明。实施例1一种可用于荧光PCR扩增的快速提取全血基因组的方法中的荧光PCR扩增反应液包括浓度或含量和组分如表1。将所述的荧光PCR扩增反应液对血液样本中的管家基因***DH进行荧光PCR扩增，方法如下：将**管颠倒混匀后，吸取100μL血液至，加入200μL的核酸释放剂，涡旋混匀，然后5000g离心30s，弃上清，获得细胞沉淀；然后再加入200μL核酸释放剂，涡旋1min至沉淀完全散开，5000g离心30s，弃上清；向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂，涡旋振荡1min，室温放置5min，12000g离心30s，取上清液即为提取的血液基因组DNA；取上清液3μL，加入到配制好的荧光PCR反应液，于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。所述的荧光PCR扩增程序如下。步骤①：50℃，2min，循环1次。步骤②：95℃，5min，循环1次。步骤③：95℃15s，55℃30s（收集荧光），循环40次。结果分析：平行扩增的荧光定量PCR反应中，阴性对照无扩增，说明反应体系正常，无污染。用本发明处理了10份来源不同的人血液样本，然后用人管家基因***DH引物进行荧光PCR扩增检测，结果如图1所示。 口腔拭子应该持续15s而不产生长久变形或者折断的现象。山东医用口腔拭子
本发明的特征在于：应用本发明的血液基因组DNA提取方法在10分钟内提取血液基因组可用于荧光PCR扩增检测，主要步骤如下。（1）将**管颠倒混匀后，吸取100μL血液或者吸取100μL口腔拭子样本保存液至，加入200μL的核酸释放剂，涡旋混匀，然后5000g离心30s，弃上清，获得细胞沉淀。（2）将步骤（1）中得到的血液细胞沉淀中再加入200μL核酸释放剂，涡旋振荡1min，至沉淀完全散开，然后5000g离心30s，弃上清。（口腔拭子样本则无需进行此步骤）。（3）向步骤（2）所获得的沉淀中加入50μL核酸释放剂，涡旋振荡1～2min；室温放置5min，12000g离心30s，取上清液即为提取的基因组DNA；所述的核酸释放剂组成为20mM～80mM的氢氧化钠溶液、～、～、～、～***钠、～3%甲酰胺；所述荧光PCR反应液组成为ROX、TaqMan探针、引物、dNTP、dUTP、UDG、BSA、聚合酶及缓冲液。附图说明图1为实例1检测的8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。图2～图5为实施例1提供的四份血液样本的三次平行实验的荧光扩增曲线图。图6为实施例2对比实例1提供的对8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。具体实施方式为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案。重庆尼龙口腔拭子供应商家口腔拭子为消灭细菌独立包装。
本发明涉及生物医药领域，涉及一种常温下长时间口腔拭子DNA保存和提取方法。背景技术：近年来，采用口腔拭子进行DNA检验有逐渐增多的趋势，由于国内没有专门用于采集口腔脱落细胞的工具，而只是使用普通的医用棉签，而不同的人采集口腔脱落细胞在擦拭次数、力度、检材剪取量及扩增用的模板量上都存在一定差异，导致了口腔拭子的DNA常温下保存效果不大稳定，影响了口腔拭子在DNA常温下保存中的应用。
为规范口腔拭子DNA的采集，提高口腔拭子的DNA保存效率，亟需一种常温下长时间口腔拭子DNA保存和提取方法。
口腔拭子DNA样本保存套装FirePureTMBalSwabDNAStorageKit货号：FG0212规格：50套产品简介：口腔拭子（口腔脱落细胞）取样是简单、无痛、无创的DNA标本采集方法。本产品包含采样拭子及保存液，适用于采集任何年龄段人群的DNA样本。产品特点：1.采集的标本数量由传统采样拭子的20%提高到了60%.2.对收集到的标本有超过90%的释放率，从而确保了结果的高度可靠性.3.塑料杆上有独特的可折断设计，方便标本运输.4.环氧乙烷灭菌消毒，独立包装.使用方法：（1）撕开外包装，小心取出口腔拭子（注意：手不能接触拭子部分）。（2）握住手柄，使拭子头部充分接触左侧脸颊内部，旋转拭子，让拭子头部充分接触口腔粘膜，重复此动作1分钟。（3）用同样的方法在右侧脸颊部/右侧上下牙床处粘膜处进行第二根拭子的取样。（4）将沾有口腔脱落细胞的拭子放到装有保存液的采集管中，装回采集管。相关产品：口腔拭子,DNA样本保存。 口腔拭子有着独有的喷射式植入尼龙纤维技术，增加标本的采集及释放量。
同样唾液和口腔拭子中核酸提取方法与血液的提取方法相似包括以下4个过程：1.通过裂解液裂解口腔脱落细胞，释放核酸物质。2.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质，去除其他杂质。3.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。4.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。传统的提取方法由于核酸提取纯化过程耗时长，成本较高，步骤繁多，增加了基因污染的风险。因此需要一种血液、唾液和口腔拭子样本经过简单处理就可以作为模板进行荧光PCR扩增检测方法，满足科研和医学领域快速检测的要求。技术实现要素：本发明提供了一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。该发明通过快速简单处理口腔拭子和血液样本，且无需纯化可直接用于荧光PCR扩增的DNA。10分钟内即可得到应用于ARMS-PCR反应体系的模板DNA。同时优化ARMS-PCR荧光体系，在反应液中加入防污染UDG酶以及提高Taq酶稳定性的的BSA，从而实现血液和口腔拭子基因组快速荧光PCR扩增检测。该方法快速简单，成本低廉，检测灵敏，且用该方法提取的基因组与商品化试剂盒提取的基因组的检测结果相近。口腔拭子供人体自然腔道等部位沾取生物样本检验用。山东医用口腔拭子
然后用同样的方法在右侧脸颊部/右侧上下牙床处粘膜处进行第二根拭子的取样。山东医用口腔拭子
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