病毒全基因组测序基本参数
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病毒全基因组测序企业商机

深度测序技术对经济市场具有的影响:未来社会的创新驱动将由信息技术向心理社会健康方面转移。可以预见,全球老年化社会到来后的经济主战场将是健康行业,而以基因测序预测健康和临床准确分型的市场将会越来越大。深度测序相关的经济市场有两个方面。一是测序仪器和技术相关的市场,二是测序应用市场的竞争。一个显见的例子是,近年来深度测序技术促进了对肺病的进一步认识和分型,更多的位点突变如ALK、ERCC1、MET、PI3K、RRM1等被陆续发现,多基因检测肺病致病驱动基因对医生准确选择靶向药物十分重要。以肺病中常见的EGFR突变型为例,对于敏感性基因突变(19Del+L858R),第1代靶向药物(如易瑞沙等)可以进行良好的调整和控制;但是对于耐药性基因突变(T790M),则需要第三代靶向药物(AZD9291)才有较好的临床效果。不久的将来,病症患者将获得更具个性化的药物,从而达到准确医疗。病毒全基因组测序具有的特点:独有的一定定量技术,实现病原定量分析。郑州病毒高通量测序排行

全基因组测序要注意的事项:全基因组测序是对未知基因组序列的物种进行个体的基因组测序。技术路线:提取基因组DNA,然后随机打断,电泳回收所需长度的DNA的片段(0.2~5Kb),加上接头,进行DNA簇(Cluster)制备,后利用Paired-End(Solexa)或者Mate-Pair(SOLiD)的方法对插入片段进行测序。然后对测得的序列组装成Contig,通过Paired-End的距离可进一步组装成Scaffold,进而可组装成染色体等。组装效果与测序深度与覆盖度、测序质量等有关。常用的组装有:SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。测序深度(Sequencingdepth)是指测序得到的碱基总量(bp)与基因组大小的比值,它是评价测序量的指标之一。测序深度与基因组覆盖度之间是一个正相关的关系,测序带来的错误率或假阳性结果会随着测序深度的提升而下降。测序的个体,如果采用的是双末端或Mate-Pair方案,当测序深度在50X~100X以上时,基因组覆盖度和测序错误率控制均得以保证,后续序列组装成染色体才能变得更容易与准确。



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病毒全基因组测序定中利用病毒传播过程中核酸序列上特定位置的变化来进行分型,着重于区分不同型别病毒的来源,是我国调整防控策略的重要依据之一。传统的病原微生物检测手段包括形态学检测、培养分离、生化检测和免疫学检测。这些方法检测周期长、灵敏度低,对操作人员的技术水平要求比较高等因素;荧光定量PCR技术和等温扩增技术等分子生物学的检测方法部分解决了上述问题,简单快速,通过对核酸特异性序列的检测,可在短时间内快速判断病原体的种类,但是这些方法无法进行混合传染鉴定和病毒溯源,随着基因组学技术的发展,高通量测序技术已经能够做到不依赖于传统的微生物培养,可直接对临床样本中的核酸进行高通量测序,然后与数据库进行比对,实现传染性疾病的溯源、检测、分型和耐药评估等多个方面,受到越来越多临床和科研工作者的关注。

RNA/DNA病毒测序对病毒基因组进行测序是快速了解病毒突变、毒力变化、病毒型别的有效方法。可以根据病毒基因组大小和类型,采用PCR、RT-PCR或shotgun测序法,对病毒的部分或全长基因组测序,结果准确可靠。服务标准:测出的序列准确性在99%以上;病毒全基因组测序测出序列在总基因组大小95%以上;数小于5个;Shotgun测序的覆盖度在6以上;PCR和RT-PCR测序达到2。服务说明:1、提供病毒DNA或RNA作为样品。2、PCR测序的DNA样品总量大于5μg,浓度大于20ng/μl。DNA无降解。3、Shotgun测序法的DNA样品总量大于20μg,浓度大于100ng/μl。DNA无降解。4、用RT-PCR和PCR测序法在提供参考序列时需同时提交样品部分序列与参考序列的比对文件,确保同源性在95%以上。


病毒全基因组进行测序,检测人员利用病毒传播过程中核酸序列上特定位置的变化来进行分型。

全基因组测序要注意的事项:全基因组测序是对未知基因组序列的物种进行个体的基因组测序。技术路线:提取基因组DNA,然后随机打断,电泳回收所需长度的DNA的片段(0.2~5Kb),加上接头,进行DNA簇(Cluster)制备,后利用Paired-End(Solexa)或者Mate-Pair(SOLiD)的方法对插入片段进行测序。然后对测得的序列组装成Contig,通过Paired-End的距离可进一步组装成Scaffold,进而可组装成染色体等。组装效果与测序深度与覆盖度、测序质量等有关。常用的组装有:SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。测序深度(Sequencingdepth)是指测序得到的碱基总量(bp)与基因组大小的比值,它是评价测序量的指标之一。测序深度与基因组覆盖度之间是一个正相关的关系,测序带来的错误率或假阳性结果会随着测序深度的提升而下降。测序的个体,如果采用的是双末端或Mate-Pair方案,当测序深度在50X~100X以上时,基因组覆盖度和测序错误率控制均得以保证,后续序列组装成染色体才能变得更容易与准确。


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病毒基因组测序的标准有:测序的完成程度,决定着基因组的下游应用,包括设计诊断产品、反向遗传系统以及开发调整对策等。研究团队希望能够通过五条标准来填补这样的空白,这些标准涵盖了完成病毒基因组的整个阶段,使用不依赖测序技术的简单条件规定了五个类别。不同的测序技术可能会很快淘汰更新,因此我们这些标准没有关联任何特定的测序平台,可以长时间的使用下去。一种基于二代测序的pedv病毒基因组分析方法。目前现有的pedv分析方法两方面的局限,第1,pedv病毒二代测序数据中存在部分甚至大量的宿主猪的基因组序列,宿主基因组的污染会影响pedv病毒基因组的拼接。第二,拼接预测病毒基因结构的方法主要是genemarks等预测软件,但由于pdev病毒基因组中基因相互重叠,其中基因内部还存在ribosomalframeshift现象,现有的基因预测软件并不能准确识别出正确的基因结构。


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